商业红曲米原料的化学剖析与体外细胞毒性评估

《Foods》：Chemical Profiling and In Vitro Cytotoxicity Assessment of Commercial Red Yeast Rice Ingredients

　　

红曲米（RYR）食品补充剂因其莫纳可林含量而被广泛用于胆固醇管理，尤其是莫纳可林K（MK），其与洛伐他汀具有相同的化学结构，洛伐他汀是一种与多种副作用相关的化合物。欧洲食品安全局（EFSA）强调了红曲米产品在成分变异性、生物活性成分表征及安全性方面的不确定性，并得出结论：无法确立莫纳可林的安全摄入水平。在本研究中，研究人员采用化学与生物学相结合的方法，对27种用于食品补充剂生产的商业半加工红曲米原料进行了研究，以表征其组成并评估潜在的安全性问题。靶向LC-MS/MS分析显示，不同产品间MK、莫纳可林羟基酸（MKA）和脱氢莫纳可林K（DMK）的水平存在显著差异。探索性定性非靶向代谢组学实现了对多种次级代谢物的推定注释，包括吖嗪酮类（azaphilones）和聚酮类（polyketides），凸显了化学谱的差异。相关性分析表明，DMK含量与人肝细胞癌细胞和原代人骨骼肌细胞中的色素分布及细胞毒性反应相关，而MK和MKA在测试条件下与毒性无显著相关性。探索性蛋白质组学分析提示，红曲米处理与辛伐他汀处理的细胞呈现不同的蛋白质丰度模式，为这些模式相关的功能注释提供了产生假说的信息。这些发现强调了综合考虑莫纳可林和次级代谢物的全面化学表征与质量控制策略的重要性，以改进红曲米补充剂的安全性评估。

论文解读：商业红曲米原料的化学剖析与体外细胞毒性评估

红曲米（RYR）作为一种传统中药和食品补充剂，因其莫纳可林含量而被广泛用于胆固醇管理，其中莫纳可林K（MK）与洛伐他汀结构相同。欧洲食品安全局（EFSA）曾指出，红曲米产品在成分变异性、生物活性成分表征和安全性方面存在不确定性，无法确定莫纳可林的安全摄入水平。为此，研究人员对27种来自意大利市场的商业半加工红曲米原料进行了化学与生物学联合表征，以鉴定可能与安全性相关的组成特征。该研究发表于《Foods》。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：针对27种商业RYR原料（由意大利各公司提供，来源不同地理区域）进行靶向LC-MS/MS分析，定量莫纳可林K（MK）、莫纳可林羟基酸（MKA）和脱氢莫纳可林K（DMK）等；利用UPLC-HRMS结合三种乙醇浓度（30%、50%、75%）进行非靶向代谢组学分析；通过层次聚类分析（HCA）和Pearson相关分析评估成分共变；采用制备型HPLC分离MKA、DMK及低DMK的RYR组分（RYRlowDMK）；在HepG2和原代人骨骼肌细胞（HSkMC）中开展Alamar Blue细胞毒性试验；最后进行探索性蛋白质组学分析（SP3消化、LC-MS/MS及STRING功能富集）。这些方法从化学和生物学层面提供了互补信息。

研究结果如下：

3.1 莫纳可林定量（Quantification of Monacolins）

通过靶向LC-HRMS定量分析，27种原料的总莫纳可林含量为0.45%–7.84%（w/w），多数样品与标注值相符，但若干样品与标注存在偏差。MKA、DMK和次级莫纳可林（MSEC）的含量均以MK当量表示，呈现显著的产品间差异。

3.2 多变量统计分析（Multivariate Statistical Analysis）

HCA基于MK/(MK+MKA)、DMK/(MK+MKA)和MSEC/(MK+MKA)三个非冗余比率进行，揭示了不同的聚类模式，区分了低MK比例伴较高DMK和MSEC的样品与高MK比例、低DMK/MSEC的样品。六个用于后续细胞试验的提取物覆盖了不同的组成比例。

3.3 非靶向分析（Untargeted Analysis）

非靶向代谢组学在三种提取