《Parasitologia》：First Molecular Evidence of Hepatozoon spp. in the Mexican Black-Tailed Rattlesnake (Crotalus molossus nigrescens) from an Urban Ecological Reserve in Central Mexico
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Hepatozoon属（Hepatozoon spp.）是感染爬行动物中最广布的血红哈氏虫（haemogregarine）寄生虫之一；然而，关于其在墨西哥本土蛇类中流行情况的信息仍然稀缺。本研究调查了在墨西哥中部城市保护地圣安赫尔佩德雷加尔生态保护区（Rese
Hepatozoon属（Hepatozoon spp.）是感染爬行动物中最广布的血红哈氏虫（haemogregarine）寄生虫之一；然而，关于其在墨西哥本土蛇类中流行情况的信息仍然稀缺。本研究调查了在墨西哥中部城市保护地圣安赫尔佩德雷加尔生态保护区（Reserva Ecológica del Pedregal de San ángel, REPSA）内获救的放养黑尾响尾蛇墨西哥亚种（Crotalus molossus nigrescens）中Hepatozoon spp.的分子检出情况。研究人员还纳入机会性采样的松鼠，以探索这些寄生虫在同域哺乳动物中的流行情况。对26条响尾蛇、6只墨西哥灰松鼠（Sciurus aureogaster）和3只岩松鼠（Otospermophilus variegatus）的血液样本，采用靶向18S rRNA基因部分片段的PCR（聚合酶链反应）进行筛查。在6条响尾蛇（23.1%）和2只墨西哥灰松鼠（33.3%）中检测到Hepatozoon spp. DNA，而所有岩松鼠均为阴性。系统发育分析提示存在两个不同Hepatozoon谱系：一个与Hepatozoon cf. ophiosauri具有系统发育亲和性，在所有阳性响尾蛇及一只松鼠中检出；另一个与Hepatozoon griseisciuri近缘，在第二只松鼠中鉴定到。这些发现代表了在C. molossus nigrescens中Hepatozoon的首个分子检测、S. aureogaster感染的首个记录，以及墨西哥境内H. griseisciuri样谱系的首次报道。尽管寄生虫鉴定仅基于部分18S rRNA基因序列，本研究拓展了墨西哥野生动物中Hepatozoon多样性的现有认知，并为未来整合分子、形态与生态学方法以更好理解受保护城市生态系统中寄生虫多样性与传播的研究提供了重要基线信息。
研究背景方面，Hepatozoon属（Hepatozoon spp.，血红哈氏虫）是全球陆生脊椎动物中分布最广的顶复门（Apicomplexa）寄生虫之一，其生活史为异主寄生，以吸血节肢动物为终宿主、脊椎动物为中间宿主，传播多经捕食感染节肢动物或猎物完成。蛇类被视为该属主要脊椎动物宿主，但墨西哥作为全球蛇类多样性最高的国家之一，本土蛇类中Hepatozoon的多样性与分布长期缺乏系统认知，既往仅零星记录于Sinaloa州野放红尾蚺（Boa constrictor）及Captive个体，以及Pituophis deppei等蜥蜴蛇类分子调查中。松鼠科（Sciuridae）动物既是城市与自然生态系统常见小型哺乳动物，也是响尾蛇等重要捕食者猎物，可能经营养级互动参与寄生虫循环，但墨西哥本土松鼠中尚无分子水平证据。黑尾响尾蛇墨西哥亚种（Crotalus molossus nigrescens）是墨西哥中部旱生火山生态系统代表种，分布于墨西哥城内的REPSA城市保护区，该地受人为压力上升，开展寄生虫基线调查对保护医学有价值。因此研究人员以REPSA放养C. molossus nigrescens为主，同域松鼠为辅，探究Hepatozoon spp.分子流行与系统发育关系。
主要关键技术方法上，研究人员于2016年8月至2018年9月在REPSA依托野生动物救援项目建立样本队列：26条C. molossus nigrescens（16雄8雌2未定）、6只S. aureogaster、3只O. variegatus，血液存于EDTA管。DNA提取采用10% Chelex 100树脂法从200 μL全血分离。Hepatozoon检测用常规PCR靶向约600 bp的18S rRNA基因片段，引物HepF300/HepR900，产物经琼脂糖电泳判定，阳性扩增子纯化后双向Sanger测序。序列在GenBank BLASTn初判后，与参考序列用ClustalW比对成587 bp对齐集，按修正AIC选模型，IQ-TREE最大似然法（10,000次超快自举）建树。
研究结果部分，按原文小节叙述。3. Results中，序列以Hepatozoon spp.名义存于GenBank（ON183251–ON183258），因部分18S rRNA分辨率有限，谱系归属为暂定。PCR检出响尾蛇阳性6/26（23.1%），S. aureogaster阳性2/6（33.3%），O. variegatus全阴。BLASTn示响尾蛇6条及松鼠1条与H. cf. ophiosauri参考（MN723845.1）100%一致；另1松鼠序列与H. griseisciuri（MK452253.1）99.47%一致。最大似然树恢复两谱系： clade I含全部响尾蛇序列、1松鼠序列及H. cf. ophiosauri参考（自举70%）；clade II含另1松鼠序列、H. griseisciuri及北美灰松鼠分离株（自举90%、97%）。
讨论部分总结，研究人员指出这是墨西哥境内Hepatozoon宿主范围与地理分布的新拓展，此前墨国记录仅限于B. constrictor与P. deppei等。所有响尾蛇分离株聚入H. cf. ophiosauri谱系，但因参考序列缺完整形态学对应、18S rRNA单标记分辨率低，故保守采用"cf."暂定名待多基因与形态确认。松鼠中两谱系并存尤其值得注意：一与响尾蛇共享H. cf. ophiosauri样谱系，支持捕食者–猎物互动维持REPSA内传播网；另一为H. griseisciuri样谱系首现墨西哥，近缘株曾见于美国S. carolinensis与英国S. vulgaris。研究者强调本研为机会性抽样、样本量小、仅靠部分18S rRNA、缺血涂片形态与节肢动物向量数据，故属基线而非定性定种。无症状感染与既往野生脊椎动物亚临床观察一致，价值在提供保护医学监测基线。
结论部分原文翻译如下：本研究记录了REPSA放养野生动物中感染的两个Hepatozoon谱系，包括在C. molossus nigrescens中Hepatozoon spp.的首个分子检测，以及S. aureogaster中Hepatozoon spp.的首个分子记录。尽管寄生虫鉴定仅基于分子证据，这些发现为未来整合形态、分子与生态学方法以阐明墨西哥野生动物中Hepatozoon spp.的多样性、传播动态与宿主关联提供了重要基线。论文发表于《Parasitologia》。
