利用商业惰性饲料和实用固定投喂策略在静水培养中大规模生产Euplotes sp.

《Aquaculture International》：Mass production of Euplotes sp. in static culture using commercial inert diets and a practical fixed-feeding strategy

　　

纤毛虫因其个体小、营养价值高且易于培养，是海洋鱼类幼虫有前景的初次开口饵料生物。它们可以在幼虫能够摄食较大活饵料之前弥合摄食缺口。由于难以在稳定培养中维持高密度，纤毛虫原生动物在受控条件下的集约化养殖仍然受限。本研究评估了不同饲料（BY——面包酵母Saccharomyces cerevisiae；RD——商业轮虫饲料；RE——商业轮虫强化产品）的效率，并测试了供应面包酵母的实用方法，以提高Euplotes sp.生物量产量。使用线性混合模型分析了种群密度、特异性生长率（μ）和总氨氮（TAN）。经过连续7天培养，RD（31,386.0 cil mL^-1）和BY（21,346.6 cil mL^-1）的种群密度高于RE（9142.3 cil mL^-1）。在停食24小时期间，RD支持种群持续增长，在第8天达到最高密度（43,727 cil mL^-1）。固定每日投喂面包酵母量（0.4 g L^-1 day^-1）被证明是基于密度投喂的有效替代方案。在两个实验中，特异性生长率均不受处理影响，但在实验2中检测到显著的时间效应。尽管培养过程中观察到高氨氮水平（33–60 mg L^-1 NH₃/NH₄⁺），纤毛虫种群在不换水的情况下仍持续增长。这些结果表明，短生产周期和简化投喂策略可支持Euplotes sp.的高效培养。进一步研究应调查长期氨氮积累的影响、培养微生物群的组成，以及使用不同食物来源培养和强化后纤毛虫的营养概况。

海洋鱼类育苗中，活饵料的及时充足供应对幼虫存活至关重要。传统首饵轮虫（Brachionus sp.）无法完全满足某些小型口裂鱼类的营养需求，而桡足类虽为优质天然饵料，但培养和使用受限。纤毛虫原生动物因个体小、营养丰富、易于培养，被认为是海洋鱼类幼虫初次投喂的候选饵料。已有研究表明，Euplotes sp.等纤毛虫可提高幼虫存活率，但其集约化培养仍因难以维持稳定高密度而受限，缺乏可靠的生产方案。面包酵母（Saccharomyces cerevisiae）虽可促进Euplotes sp.生长，但最适浓度和强化策略仍需优化。因此，本研究旨在评估不同饲料类型和更实用的投喂方式对纤毛虫生物量生产的影响，为建立大规模培养方案提供依据。

研究人员在澳大利亚杰拉尔顿Batavia Coast Maritime Institute（BCMI）开展了两个独立实验。实验1比较了面包酵母（BY）、商业轮虫强化产品（RE）和商业轮虫干饲料（RD）对Euplotes sp.种群动态的影响，培养7天并观察停食24小时后的变化；实验2测试了固定日投喂量（0.2和0.4 g L^-1 day^-1）与基于密度调整投喂量的对照组（TC）的效果。结果显示，RD和BY均能高效促进种群增长，第7天密度分别达31,386.0和21,346.6 cil mL^-1，显著高于RE；停食条件下仅RD继续增长至43,727 cil mL^-1。固定投喂0.4 g L^-1 day^-1面包酵母可获得与密度调整投喂相当的密度，且操作更简便。尽管氨氮浓度持续升高至36–64 mg L^-1，纤毛虫种群仍保持增长。该研究提供了简单、低成本的Euplotes sp.量产策略，为其作为海洋鱼类幼虫活饵料的实际应用奠定了基础。论文发表在《Aquaculture International》。

关键技术方法如下：研究人员从西澳大利亚杰拉尔顿BCMI被污染的轮虫培养物中经70/15 μm筛网逐级过滤分离获得Euplotes sp.，以面包酵母维持培养。实验在8-L塑料桶中进行，使用机械过滤和紫外线消毒的自然海水，不换水；每日用Sedgwick-Rafter计数室显微计数估算密度，计算特异性生长率（μ）。数据经log₁₀转换后用线性混合模型（LMM）分析，固定效应为处理、时间及交互项，实验桶为随机效应。

研究结果：

总氨氮（TAN）：两个实验中TAN均随时间显著增加，实验1最高达64 mg L^-1，实验2约36 mg L^-1。LMM显示时间效应极显著，处理效应仅在个别时间点（如实验1第1天和实验2第7天）出现差异，表明氨氮累积主要受培养时间驱动。

实验1：饲料类型显著影响种群密度的时间动态。第1-2天RE和RD密度高于BY；第5天起RE持续低于BY和RD。第7天BY和RD密度分别为21,346.6和31,386.0 cil mL^-1，均显著高于RE（9,142.3 cil mL^-1）。停食24小时后，RD继续增长至43,727 cil mL^-1，而BY和RE分别下降31.8%和25%。μ不受处理、时间或交互作用显著影响，最大日μ分别为BY 2.340、RE 1.439、RD 1.754 day^-1。

实验2：投喂方式显著影响密度时间动态。T0.4在第3-5天密度高于TC和T0.2；第7天T0.4和TC密度接近且均显著高于T0.2。与初始密度相比，TC和T0.4分别增加252倍和155倍，T0.2仅增加17.4倍。μ仅受时间显著影响，处理间无差异；T0.4第1天μ显著低于其后各天，而T0.2和TC内无显著日间差异。

讨论部分指出，氨氮累积主要来自代谢活动和有机质输入，Euplotes sp.表现出较高的氨氮耐受性（文献报道可达100 mg L^-1），但长期累积可能恶化培养条件，建议7-8天短周期生产。RD因营养全面，在停食条件下仍维持种群增长，优于BY和RE；固定投喂0.4 g L^-1 day^-1面包酵母可免除每日计数，简化管理、降低劳动需求。投喂海洋鱼类幼虫前，建议使用RD等强化饲料提升纤毛虫营养组成，但需进一步评价其实际营养效果。

结论：本研究提供了Euplotes sp.大规模生产的实用策略。面包酵母（BY）和商业轮虫饲料（RD）均能支持7天的高效生物量生产，但停食条件下仅RD能维持种群持续增长。固定日投喂0.4 g面包酵母L^-1 day^-1（T0.4）无需每日计数调整投喂量，简化了培养管理和生产操作。虽然培养中氨氮浓度较高，但纤毛虫种群在不换水的情况下仍持续增长。基于这些结果，推荐7-8天的短生产周期以优化生物量产量并保持良好培养条件。快速种群增长凸显了Euplotes sp.在简单、低成本生产系统中作为海洋鱼类幼虫活饵料的潜力。