《Journal of Neuroimmunology》：Plasma NET-associated readouts and a multidomain neuroimmune injury axis after experimental subarachnoid hemorrhage: response to dual-pathway modulation
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•实验性 SAH 后数小时内，血浆细胞游离 DNA（cfDNA）、MPO–DNA 复合物和瓜氨酸化组蛋白 H3（citH3）升高。•与 NETosis 相关的变化与免疫血栓形成、氧化还原失衡以及血 - 脑脊液屏障破坏平行。•联合使用多纳酶阿尔法（dornase alfa）和秋
• 实验性 SAH 后数小时内，血浆细胞游离 DNA（cfDNA）、MPO–DNA 复合物和瓜氨酸化组蛋白 H3（citH3）升高。
• 与 NETosis 相关的变化与免疫血栓形成、氧化还原失衡以及血 - 脑脊液屏障破坏平行。
• 联合使用多纳酶阿尔法（dornase alfa）和秋水仙碱可产生最强的多域生物标志物衰减。
• 复合多域生物标志物负担与 24 小时时的神经功能障碍相关（Spearman ρ = 0.92）。
• 术后早期神经免疫活性可能代表 NET 靶向干预的候选窗口。
引言 蛛网膜下腔出血（SAH）仍然是毁灭性的神经科急症，幸存者具有较高的早期死亡率和严重的长期残疾（Auricchio 等，2022；Lauzier 等，2023）。尽管动脉瘤处理技术有所改善，但出血后的前 72 小时仍主要由早期脑损伤主导——这是一种急性神经功能障碍、微血管受损、氧化应激、屏障失效和神经炎症放大的多维综合征（Lauzier 等，2023）。从神经免疫角度来看，核心问题不再是这些过程是否共存，而是它们如何在机制上耦合并转化为可测量的功能障碍。
在早期先天免疫应答者中，中性粒细胞尤为相关。激活的中性粒细胞释放中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）——由去凝聚 DNA、瓜氨酸化组蛋白和髓过氧化物酶等颗粒蛋白组成的染色质 - 蛋白支架——从而放大血栓形成、内皮损伤和实质损伤（Brinkmann 等，2004；Fuchs 等，2010；Brill 等，2012；Fuchs 等，2012）。SAH 的实验和临床工作支持 NET 相关生物学在微血管梗阻、血管痉挛相关损伤和迟发性缺血性并发症中的作用（Hendrix 等，2024；Nakagawa 等，2024；Zeineddine 等，2024；Zeng 等，2022；Zhou 等，2022）。神经 - 免疫血栓形成、氧化还原和血 - 脑脊液屏障相互作用表明，NETosis 作为一种神经免疫放大器发挥作用，而不是一个孤立的标志物（Lou 等，2024；Savi 等，2024；Vorobjeva 和 Chernyak，2020）。
行为障碍是早期脑损伤最直接的实验表现。如果没有功能性读出，很难确定给定的神经免疫轴是否与神经状态有意义地联系。改良神经功能评分（mNSS）和旷场测试提供了早期感觉运动功能障碍和运动抑制的互补测量（Chen 等，2001；Walsh 和 Cummins，1976；Seibenhener 和 Wooten，2015）。将这些读出与 NETosis 相关标志物锚定，提供了一个与脑血管损伤神经免疫研究范围相符的功能优先框架。
我们假设 NETosis 不仅仅是炎症的附带现象，而是免疫血栓形成和屏障破坏性早期脑损伤的候选机制放大器，并且双通路调节将减弱多域神经免疫读出并改善早期神经功能。使用了两种机制不同的探针：多纳酶阿尔法，一种降解细胞外染色质支架的重组 DNase I；以及秋水仙碱，可抑制微管蛋白依赖的 NET 形成。这种双探针设计得到了既往关于内源性 NET 抑制以及跨血栓炎症和脑血管环境的药理学 NETosis 抑制工作的支持（Albadawi 等，2016；Yost 等，2016；Vaidya 等，2021；Denorme 等，2022；Jiménez-Alcázar 等，2015；Huang 等，2025），重组 DNase 方法既定的临床使用（Shak 等，1990；Fuchs 等，1994），以及向急性脑血管疾病的转化延伸（EXTEND-IA DNase，
NCT05203224 ）。
章节摘要 研究设计 这是一项前瞻性、随机化、对照、评估者盲法的实验性动物研究，重点关注早期行为功能障碍及其与 SAH 后循环和脑脊液生物标志物轨迹的关系。该研究遵循 ARRIVE 2.0 报告原则（Percie du Sert 等，2020）；完整的检查表作为补充表 12 提供。样本量和排除标准预先定义。所有行为评估均由对分组情况设盲的研究者进行；
实验性 SAH 后 24 小时的行为结果 在 92 只入组动物中，16 只在结果评估前被排除（7 只早期死亡，5 只 SAH 诱导失败，3 只溶血，1 只脑脊液污染），最终分析 76 只动物（12/12/13/12/14/13）。排除概况总结于表 2。与假手术组（Sham）相比，SAH + 载体组动物表现出严重的早期功能障碍（mNSS 11.50 ± 1.05 vs 1.33 ± 0.52；p < 0.001）。干预组呈分级模式改善：DNase-L 8.83 ± 0.75，DNase-H 6.83 ± 0.75，秋水仙碱 6.17 ± 0.75，联合组
讨论 本研究围绕一个功能优先的神经免疫问题设计：实验性 SAH 后的早期神经功能障碍是否与 —— 并且是否可以通过 —— 调节 NETosis 相关的多域损伤轴来减弱。数据与该解释一致。行为障碍在 24 小时时尤为突出，被 mNSS 和旷场测量稳健地捕捉，并遵循在 NETosis、免疫血栓形成、血 - 脑脊液屏障和氧化还原中观察到的相同组层级
结论 实验性 SAH 后的早期神经功能障碍与跨越 NETosis、免疫血栓形成、氧化还原失衡和血 - 脑脊液屏障破坏的多域神经免疫损伤轴相关。在此实验框架内，NETosis 的双通路调节 —— 结合细胞外 DNA 降解与细胞骨架 NET 形成抑制 —— 与测量的神经免疫读数的最一致减弱以及早期神经功能的改善相关。The
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CRediT 作者贡献声明 Yavuz Erdem: 写作 – 审阅与编辑，写作 – 初稿，监督，方法论，概念化。Berkay Ayhan: 写作 – 审阅与编辑，调查，形式分析，数据整理。Mehmet Emre Y?ld?r?m: 写作 – 审阅与编辑，调查，形式分析。
伦理批准 所有动物程序均事先获得安卡拉培训与医院机构动物护理和伦理委员会批准（批准号 0091-921；2026 年 1 月 29 日），并符合欧盟指令 2010/63/EU 和 ARRIVE 2.0 报告指南（补充表 12）。
资助 作者声明本工作未获得特定资助、拨款或财务支持。
未引用参考文献 EXTEND-IA DNase 研究者，2022
竞争利益声明 作者声明他们没有已知的竞争财务利益或个人关系可能影响本论文中报告的工作。
Yavuz Erdem|Berkay Ayhan|Mehmet Emre Y?ld?r?m
