《Polymers》：Influence of Reconstitution Methods and Diluents on the Physicochemical Characteristics of Poly-L-Lactic Acid Suspensions: An In Vitro Study
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重构后的聚-L-乳酸（PLLA）产品的宏观和微观聚集模式可能因产品配方、稀释剂、制备方案和时间而异。这项描述性体外初步研究比较了两种商业制剂——StiCol Volume（150 mg PLLA重构至9 mL）和StiCol Soft（50 mg PLLA重构
重构后的聚-L-乳酸（PLLA）产品的宏观和微观聚集模式可能因产品配方、稀释剂、制备方案和时间而异。这项描述性体外初步研究比较了两种商业制剂——StiCol Volume（150 mg PLLA重构至9 mL）和StiCol Soft（50 mg PLLA重构至6 mL），在11种稀释剂条件和两种复合制备方案下：辊混30分钟和手动摇动3分钟随后水化3小时。每种制剂-稀释剂-方案组合各评估一份制备品。在即刻、15、30、45、60分钟和24小时记录宏观外观；从15分钟开始以×40和×100进行显微镜检查。两名评估者应用有序视觉聚集量表，对结果进行描述性分析。在所观察的制备品中，StiCol Soft制剂通常表现出比StiCol Volume更低的聚集等级；然而，两种产品在名义PLLA浓度、粒径和赋形剂组成上存在差异，因此该模式不能仅归因于浓度。基于SWFI的条件通常比基于NSS的条件显示出更少的微观团块。辊混/30分钟方案也倾向于比手动/3小时方案表现出更低的等级，尽管混合模式和水化时间不可分离。宏观上层积累被解释为垂直相分离，表现为乳状/浮选样行为而非沉降。这些探索性发现为包含标准化取样、再分散性、粒径、流变学和可注射性测试的重复研究提供了假设；它们并未确定给药窗口或改善临床安全性。
**论文解读文章**
**研究背景与问题**
聚-L-乳酸（PLLA）是一种可生物降解、生物相容的聚合物，通过逐渐的组织反应刺激新胶原生成，在面部容积恢复、皮肤松弛改善和皱纹减轻方面具有持续改善效果，已用于临床超过二十年。与预填充的透明质酸填充剂不同，注射用PLLA通常以冻干粉末形式供应，使用前需进行重构。重构后的悬浮液可能因载体组成、终体积、水化时间和混合程序而出现异质性，包括颗粒分布不均、可见团块或垂直相分离，这些可能影响制剂一致性。已有研究提出，不均匀的颗粒分布可能是注射后局部高颗粒密度、丘疹或结节的可能原因之一，但该关系仍属理论推测。尽管PLLA与聚-D,L-乳酸（PDLLA）均为胶原刺激型聚乳酸填充剂，但两者在聚合物立体化学、颗粒形态、粒径、赋形剂组成及制造工艺上存在差异，其重构行为不能假定相同。当前对PLLA临床应用稀释剂与制备方案的系统性视觉比较仍十分有限。因此，本研究旨在比较两种商业PLLA制剂在多种稀释剂条件、两种复合混合/水化方案及连续观察时间下的宏观外观和微观聚集模式，以生成假设，为后续重复性研究提供基础。论文发表在《Polymers》。
**关键技术方法**
本研究为描述性体外初步研究，未涉及样本队列来源。主要技术方法包括：1）两种商业PLLA制剂（StiCol Volume和StiCol Soft）的评估，其名义PLLA浓度、粒径及赋形剂组成不同；2）11种稀释剂条件，包括无菌注射用水（SWFI）、生理盐水溶液（NSS）、轻度交联透明质酸溶液（SCL-HA）及其与利多卡因、肾上腺素的组合；3）两种复合制备方案：辊混30分钟与手动摇动3分钟后续水化3小时，混合模式与水化时间同时变化；4）宏观评估（即刻至24小时连续摄影）与显微镜检查（×40和×100）；5）采用半定量有序视觉聚集量表（0-3级）由两名独立评估者进行评分，并通过线性加权Cohen's kappa评估观察者间一致性。
**研究结果**
**3.1 总体发现**：在记录的图像集中，视觉聚集等级和宏观分离模式在不同商业制剂、稀释剂条件、复合制备方案及观察时间上存在差异。StiCol Soft通常等级低于StiCol Volume，但该比较反映了两产品的综合差异而非仅PLLA浓度。基于SWFI的条件等级通常低于基于NSS的条件。辊混/30分钟方案等级通常低于手动/3小时方案，但机械混合与水化时间无法区分。所有220对条件-时间评分的精确一致性为89.5%，线性加权Cohen's kappa为0.91。
**3.2 宏观外观**：代表性宏观照片显示，不同条件和时间下混浊度、均匀性、可见团块和垂直相分离存在差异。基于SWFI的图像在早期观察中相对均匀，尤其对于StiCol Soft和辊混/30分钟方案，但部分面板中可见上层浓缩层，其位置更符合乳状/浮选样分离而非沉降。基于NSS的图像通常表现出更早、更明显的异质性和垂直分离，尤其在StiCol Volume和手动/3小时方案中。含SCL-HA的图像显示出与NSS不同的分离模式，单纯麻醉剂条件在照片中表现为中间状态。
**3.3 显微镜发现**：15分钟时，基于SWFI的图像通常比基于NSS的图像含有更少的大而紧凑的团块，该模式在StiCol Soft和辊混/30分钟方案中最明显。基于NSS的图像中团块更频繁，颗粒间距离更短。含SCL-HA的图像显示出与NSS不同的分布模式，但团块仍可见。后期存储图像中，若干条件（尤其StiCol Volume、基于NSS的稀释剂和手动/3小时方案）显示团块增加。
**3.4 商业制剂比较**：StiCol Volume在可用图像集中通常表现出比StiCol Soft更高的视觉聚集等级和更明显的分离。该比较未分离PLLA浓度，因为产品在粒径、冻干总质量、终体积以及可能的赋形剂比例和制造特性上均存在差异。
**3.5 稀释剂组成模式**：基于SWFI的条件等级通常低于基于NSS的条件。在部分比较中，向任一基础载体添加1 mL 2%利多卡因与更高等级相关，而添加肾上腺素未产生一致视觉差异。基于NSS的条件频繁显示出比SWFI更明显的微观团块和宏观垂直分离，但离子强度、pH和渗透压未测量。
**3.6 复合制备方案比较**：辊混/30分钟方案在多个比较中倾向于显示比手动/3小时方案更低的聚集等级，但因两种方案在机械作用和水化时间上同时变化，该模式不能归因于辊混本身。
**3.7 时间依赖性变化**：从30分钟起，多个制备品的视觉团块或垂直相分离增加。15分钟为最早微观评估时间点。同一试管在无重混条件下随时间观察，描述的是实验室静置行为而非临床操作。24小时时，若干条件表现出更明显的垂直分离和异质性微观视野，宏观上向上积累被记录为乳状/浮选样行为而非沉降。
**讨论与结论**
**讨论部分总结**：本描述性体外初步研究发现，不同商业PLLA制剂、稀释剂条件、复合制备方案及观察时间下，视觉聚集等级和垂直相分离模式存在差异。这些观察具有假设生成性质，因为每个条件仅一份制备品，图像采集、视野选择和取样未完全标准化。离子强度和CMC行为的可能作用已在既往PDLLA研究中提出，但本研究未测量离子强度、pH、渗透压、CMC构象或颗粒间作用力。利多卡因和肾上腺素的作用机制无法确定，因其制剂详情、pH、防腐剂和渗透压未完全表征。SCL-HA可能具有缓冲、粘度或HA介导的稳定作用，但均为推测。StiCol Volume与StiCol Soft的比较不能仅归因于浓度。辊混/30分钟与手动/3小时方案的比较存在内在混淆。向上积累更符合乳状/浮选样行为。未进行再分散性或剂量均匀性测试，因此分离的可逆性和实际意义未知。本研究未评估组织分布、可注射性或临床不良事件。主要价值在于为受控的后续研究确定制备变量和方法学问题，而非定义优选临床方案。优势包括临床相关稀释剂条件的广泛矩阵、两种制剂和两种方案的评估，以及连续时间点的宏观与微观互补记录。局限性包括无技术重复、产品差异不止浓度、方案差异不止混合模式、取样与视野未标准化、评估者未完全盲法、未进行再分散性、粒径、ζ电位、pH、渗透压、粘度、流变学、剂量均匀性或挤出力测量。
**研究结论**：在这项描述性初步研究中，宏观外观和微观聚集等级在两种商业PLLA制剂、稀释剂条件、两种复合混合/水化方案及观察时间上存在差异。产品比较不能仅归因于浓度，方案比较不能分离混合模式与水化时间。向上宏观积累被解释为乳状/浮选样垂直相分离而非沉降。这些发现未确定不可逆性、剂量均匀性、可注射性、给药窗口或临床安全性。它们为关于重构和再分散性的重复性、定量表征研究提供了基础。
