《Frontiers in Aging》：Age-related hearing loss persisted in mice that had demonstrated improved healthspan, reduced inflammaging and extended lifespan following expression of the naked mole-rat transgene for hyaluronan synthase 2
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背景：65至74岁成人中约三分之一报告听力困难，包括年龄相关性听力损失（AHL，老年性聋）。C57BL/6小鼠因较早发生AHL被广泛用于临床前AHL研究，热量限制（CR）可减轻该品系AHL并改善健康寿命与长寿。近期开发的表达裸鼹鼠透明质酸合酶2（nmrHas2
背景：65至74岁成人中约三分之一报告听力困难，包括年龄相关性听力损失（AHL，老年性聋）。C57BL/6小鼠因较早发生AHL被广泛用于临床前AHL研究，热量限制（CR）可减轻该品系AHL并改善健康寿命与长寿。近期开发的表达裸鼹鼠透明质酸合酶2（nmrHas2）的C57BL/6转基因小鼠可产生极高分子量透明质酸（vHMM-HA），同样表现出健康寿命改善、炎症衰老减轻和寿命延长。因此研究人员评估了nmrHas2小鼠是否存在AHL减轻的证据。目的：确定nmrHas2小鼠中AHL是否减轻。方法：本研究补充了一项关于nmrHas2与雌性生殖衰老的大型调查。1月龄时他莫昔芬诱导nmrHas2+雌鼠全身表达nmrHas2；nmrHas2?对照接受他莫昔芬或载体。在小鼠约3或12月龄前约2周行听觉脑干反应（ABR）检测，安乐死后约2周收集耳蜗与生殖组织。结果：点击声及六种纯音（4–32 kHz）ABR阈值显示，nmrHas2+小鼠与对照组在3至12月龄间均出现显著听力损失，无证据表明nmrHas2减轻AHL。定量RT-PCR确认nmrHas2+小鼠耳蜗存在nmrHas2表达。结论：尽管既往报道nmrHas2对其它衰老表型有益，其全身表达并未减轻C57BL/6小鼠AHL。该发现与CR不同，提示vHMM-HA与CR通过不同机制影响衰老。
研究背景与立项依据：年龄相关性听力损失（AHL，亦称老年性聋）由耳蜗在衰老过程中不可逆损伤引起，全球65–74岁人群约三分之一自报听力困难。C57BL/6小鼠因携带Cdh23基因单核苷酸多态性（SNP）而较早出现AHL，是AHL临床前研究常用模型；既往研究显示热量限制（CR）在12月龄时可基本预防该品系AHL，同时改善健康寿命、减轻炎症衰老并延长寿命。裸鼹鼠（NMR）因其合成极高分子量透明质酸（vHMM-HA，6–12 MDa）而具抗癌与极端长寿（40年以上）特性，vHMM-HA通过结合CD44受体诱导细胞保护通路并抵抗低分子量透明质酸（LMM-HA）的促炎作用。Zhang等（2023）构建的可诱导裸鼹鼠透明质酸合酶2（nmrHas2）转基因C57BL/6小鼠，在全身表达nmrHas2后同样获得健康寿命延长、炎症衰老减轻与寿命增加，但尚不清楚该转基因能否像CR一样缓解AHL。鉴于CR与nmrHas2小鼠共享多项抗衰老表型，研究人员假设nmrHas2表达可减轻AHL，并依托同期开展的nmrHas2雌性生殖衰老研究进行补充验证。该研究发表于《Frontiers in Aging》。
主要关键技术方法：研究采用雌性C57BL/6背景nmrHas2转基因小鼠，通过R26-CreERt2与nmrHas2杂合交配获得nmrHas2+（转基因阳性）与nmrHas2?（阴性）后代；1月龄时以他莫昔芬（75 mg/kg，连续5天腹腔注射）诱导nmrHas2+小鼠全身表达，nmrHas2?组设他莫昔芬与玉米油载体对照。在3月龄与12月龄安乐死前约2周行ABR检测（点击声及4、8、12、16、24、32 kHz纯音，10 dB步进，阈值为诱出波形最低声压级）。耳蜗组织经显微解剖后提取RNA，以偏好性引物行定量RT-PCR验证nmrHas2耳蜗表达（Gapdh为内参）。统计采用广义线性模型与计划事后对比（JMP Pro 17）。样本队列来自上述繁育方案，分6组：nmrHas2? 3月他莫昔芬（n=4）、nmrHas2? 3月载体（n=6）、nmrHas2? 12月他莫昔芬（n=9）、nmrHas2? 12月载体（n=8）、nmrHas2+ 3月他莫昔芬（n=5）、nmrHas2+ 12月他莫昔芬（n=8）。
研究结果：
3.1 ABR检测结果：对点击声与全部测试纯音，ABR阈值仅随年龄显著升高（P≤0.004），基因型无主效应（P≥0.37）。事后对比显示3月龄至12月龄间nmrHas2?与nmrHas2+小鼠在点击声及多数频率纯音下阈值均显著上升（nmrHas2+在32 kHz P=0.08未达显著），但12月龄nmrHas2+与nmrHas2?间无统计学差异（点击声P=0.26，纯音P≥0.26）。结果表明nmrHas2表达未减轻AHL。
3.2 耳蜗nmrHas2表达：qRT-PCR显示nmrHas2+小鼠耳蜗Has2相对表达量（781.98±234.89）远高于nmrHas2?（1.00±0.38），凝胶电泳与Sanger测序确认产物为nmrHas2序列，证实转基因在耳蜗成功诱导。
讨论部分总结：研究人员指出，nmrHas2改善健康寿命、减轻炎症衰老与延寿的效应与AHL缓解“解耦联”，不同于CR。C57BL/6背景的Cdh23变异导致毛细胞内源性损伤，vHMM-HA抗炎特性未能克服该机制；可能原因包括耳蜗内vHMM-HA产量不足，或小鼠透明质酸酶活性高致vHMM-HA降解。文中探讨vHMM-HA可能经NRF2（核因子红细胞2相关因子2）通路起效，但耳蜗感觉上皮仅外柱细胞表达CD44（vHMM-HA主要受体），毛细胞不表达CD44，故细胞外基质改变未挽救毛细胞。未来可在CD/1炎等机制主导AHL的品系、噪声/药物损伤模型或氧化应激模型中再评vHMM-HA作用。
结论翻译：尽管既往研究表明CR小鼠与nmrHas2小鼠共享改善健康寿命、减轻炎症衰老和延长寿命等表型，但仅CR缓解了C57BL/6小鼠AHL，而nmrHas2小鼠未显示AHL减轻。这指向两种干预在耳蜗内作用机制存在差异。
