flexiAsCas12a及其他Cas12a变体增强了Cas12a核酸酶在引物编辑中的适用性

《Genome Biology》：flexiAsCas12a and other Cas12a variants enhance the applicability of Cas12a nucleases in prime editing

　　

摘要

背景

在众多基于多功能CRISPR-Cas系统的基因组操控工具中，prime editing（先导编辑）作为一种无需诱导双链断裂即可实现精确插入、缺失和替换的方法，最为突出。Cas12a核酸酶凭借其独特性质，被广泛应用于基因组编辑和核酸检测；然而，其相对较长的PAM识别序列要求限制了其应用范围。

结果

我们开发了PAM灵活型Cas12a变体，使其能够在哺乳动物细胞内有效发挥作用，从而切割此前对Cas12a核酸酶不可达的目标。在我们开发的Lb-、As-、Mb-和FnCas12a变体中，flexiAsCas12a（具有灵活PAM识别能力的AsCas12a）效果最佳，将Cas12a变体可识别的PAM序列范围扩展至包括NATN、NCCN和GTCN序列。利用目前具有放宽PAM识别能力的Cas12a变体（impLbCas12a、flexiAsCas12a和enAsCas12a），我们开发了环状RNA引导的分割式先导编辑器，并在非经典PAM序列上验证了其功能。

结论

flexiAsCas12a加入Cas12a PAM变体工具箱，使Cas12a核酸酶能够触及越来越多的目标序列。