《Neural Plasticity》：Acupressure Potentially Promoting the Learning and Memory Capabilities of Hypoxic Ischemic Cerebral Palsy Rats
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摘要翻译：
目的：研究穴位按压能否改善缺氧缺血性脑瘫（HIE）大鼠的学习与记忆能力，以及该机制是否与海马神经可塑性相关。
方法：本研究采用单侧HIE大鼠模型，设假手术对照组、HIE对照组和穴位按压组。穴位按压组在HIE造模后接受4周治疗。通过旷场实验、
摘要翻译：
目的：研究穴位按压能否改善缺氧缺血性脑瘫（HIE）大鼠的学习与记忆能力，以及该机制是否与海马神经可塑性相关。
方法：本研究采用单侧HIE大鼠模型，设假手术对照组、HIE对照组和穴位按压组。穴位按压组在HIE造模后接受4周治疗。通过旷场实验、新物体识别（NOR）、Y迷宫和Morris水迷宫（MWM）行为学实验检测大鼠学习记忆能力；采用高尔基染色检测海马树突棘密度及树突分支数量与长度；采用电子显微镜观察突触前膜、突触后膜的厚度、宽度和长度；通过免疫组织化学和免疫荧光染色观察突触后α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体（AMPAR）亚基AMPAR1、AMPAR2及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B（NMDAR2B）；通过清醒脑电图（EEG）记录大鼠海马CA1区神经元电活动；并采用Western blot检测海马中AMPAR和N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）的蛋白表达。
结果：穴位按压可减轻HIE诱导的行为异常，促进海马神经可塑性功能恢复，表现为突触间隙增宽、突触膜改善、树突分支数量增加、树突长度延长及树突棘密度增强（p < 0.05）。HIE组海马中神经可塑性相关蛋白AMPAR和NMDAR均下调（p < 0.05），免疫荧光染色显示NMDAR和AMPAR阳性率呈相同趋势（p < 0.05）。而穴位按压治疗后，上述效应可部分逆转（p < 0.05）。EEG结果显示，模型组频谱变为慢波（δ增加、θ减少）且振幅紊乱，提示神经元损伤；治疗组频谱部分恢复（θ回升、δ减少），表明干预有效。
结论：穴位按压可通过调节与突触后膜相关的机制，促进海马功能可塑性恢复及神经可塑性相关电信号上调，从而改善HIE的学习记忆功能。
论文解读文章：
**研究背景与意义**
缺氧缺血性脑瘫（HIE）是导致儿童长期神经功能障碍的重要病因，常表现为运动障碍、生长受限和认知发育迟缓，严重时可致残或致死。早产是HIE的主要诱因，全球每年有大量五岁以下儿童因围产期缺氧缺血并发症死亡。现有治疗手段存在毒性大、副作用明显等局限。穴位按压作为中医疗法的重要组成部分，已在多个国家用于HIE患者的临床康复，能够改善运动能力和发育结局，且较单纯康复治疗更易被患者接受、安全性更高。然而，既往研究多聚焦于临床或行为学结局，穴位按压改善学习记忆的深层机制尚未明确。缺氧缺血损伤可导致学习记忆障碍，并与海马神经可塑性密切相关，涉及多种关键蛋白的动态修饰。海马CA1区是学习记忆和突触可塑性（如长时程增强，LTP）的关键脑区，突触后NMDAR和AMPAR在突触可塑性中发挥重要作用。目前，穴位按压对HIE模型海马突触可塑性在分子、形态和电生理层面的影响，包括AMPAR/NMDAR表达、树突重塑、突触超微结构及海马清醒EEG/局部场电位（LFP）变化，鲜有系统研究。为此，研究人员探讨了穴位按压膀胱经23号穴（BL23，肾俞）是否通过调节海马CA1突触可塑性改善HIE大鼠学习记忆，并揭示其潜在机制。该研究成果发表于《Neural Plasticity》。
**研究内容与结论**
研究人员建立了单侧HIE大鼠模型，将新生鼠随机分为假手术对照组（CN）、HIE对照组（HIE）和穴位按压组（AP），AP组在造模后接受BL23穴位按压治疗4周。行为学检测显示，HIE导致大鼠运动能力下降、学习记忆受损，而穴位按压可显著改善这些行为缺陷。形态学方面，HIE大鼠海马CA1区神经元树突棘密度降低、树突分支减少、平均分支长度缩短，突触间隙变窄、突触活动区长度缩短、突触后致密物（PSD）变薄，胶质细胞出现肿胀、胶质纤维紊乱等超微结构损伤；穴位按压可部分逆转上述改变。分子水平上，HIE组海马AMPAR1、AMPAR2、NMDAR2B、突触素（SYP）和突触后致密蛋白95（PSD95）表达均显著下调，穴位按压后这些蛋白表达明显回升。清醒脑电记录显示，HIE大鼠海马CA1区LFP呈现慢波化（δ波增加、θ波减少）和幅度紊乱，而穴位按压后θ波回升、δ波减少，提示神经电活动部分恢复。
**主要技术方法**
该研究使用的动物为SPF级孕鼠（来自云南中医药大学清洁级实验动物中心，许可证号SCXK [JING] 2024-0001）所产新生SD大鼠，共30只，随机分为3组。主要方法包括：单侧颈总动脉电凝结合缺氧制备HIE模型；BL23穴位按压干预4周（频率100–120次/分钟，每次2分钟，力度1.77±0.54 N）；旷场、新物体识别（NOR）、Y迷宫和Morris水迷宫（MWM）行为学检测；高尔基染色观察海马CA1/CA3区树突棘密度与树突形态；透射电镜观察突触超微结构；免疫荧光和免疫组化检测AMPAR1、AMPAR2、NMDAR2B；微丝阵列电极植入海马CA1区记录清醒状态下LFP；Western blot检测相关蛋白表达。
**结果分述**
（一）穴位按压减轻HIE诱导大鼠的脑瘫表现：HIE组旷场实验中总距离、平均速度显著下降，静止时间延长；NOR识别指数降低；MWM逃避潜伏期延长、目标象限距离减少、穿越平台次数减少；Y迷宫自发交替率降低。穴位按压组上述指标显著改善，其中NOR识别指数与假手术组无显著差异。
（二）穴位按压修复HIE诱导大鼠的神经结构：高尔基染色显示HIE组树突棘密度、树突分支数、平均分支长度均较假手术组降低，穴位按压组显著恢复；电镜观察显示HIE组突触活动区长度缩短、突触间隙增宽、PSD厚度变薄，穴位按压组突触超微结构趋于正常，胶质纤维可见度提高。
（三）穴位按压缓解HIE大鼠海马NMDAR/AMPAR轴过度抑制：免疫荧光和免疫组化显示，HIE组CA1和CA3区AMPAR1、AMPAR2、NMDAR2B阳性率及光密度值均显著低于假手术组，穴位按压后上述指标部分回升。
（四）穴位按压改善HIE大鼠海马神经元EEG异常：模型组LFP频谱以δ波为主，θ波能量显著降低，幅度分布紊乱，出现尖波/棘波等病理波；穴位按压组θ波段能量回升，δ段能量下降，幅度分布趋向正常。
（五）穴位按压增加HIE大鼠海马突触后膜相关蛋白表达：Western blot显示HIE组AMPAR1、AMPAR2、NMDAR2B、SYP、PSD95表达均下调，穴位按压组上述蛋白表达显著增加。
**讨论与结论**
讨论部分指出，HIE是持续进展性疾病，现有疗法存在毒性大、副作用多等局限。穴位按压作为非侵入性、经济有效的疗法，可通过刺激特定穴位产生类针刺效应。BL23为肾经背俞穴，符合中医“补肾益精、活血通络”理论。研究发现HIE导致海马突触可塑性相关信号分子（NMDAR、AMPAR）下调，而穴位按压可上调其表达，并伴随树突棘增多、突触结构改善及LFP恢复，提示穴位按压可能通过促进突触后膜受体功能恢复，增强神经可塑性。LFP的慢波化反映了谷氨酸能突触传递受损，这与AMPAR/NMDAR介导的突触后电位异常一致。PSD95和SYP的调节也参与了突触可塑性的改善。研究为穴位按压治疗缺氧缺血性脑瘫提供了新的分子机制视角，但仍需进一步研究阐明具体信号通路。
研究结论：本研究发现，穴位按压在HIE诱导的脑瘫大鼠模型中发挥治疗作用。按压BL23可抑制AMPAR/NMDAR的过度低表达，这与改善HIE大鼠海马神经可塑性相关，其机制可能涉及增加神经元树突棘数量及相关蛋白表达水平。
