《Journal of Functional Foods》：Lycium ruthenicum anthocyanins: Biosynthetic regulation and intestinal immunomodulatory effects along the gut immune axis
黑果枸杞（Lycium ruthenicum）是一种原产于中国西北高海拔地区的珍贵药食两用植物，其积累丰富的花色苷，包括单体矮牵牛素-3-O-(反式-对-香豆酰基芸香糖苷)-5-O-葡萄糖苷（petunidin-3-O-(trans-p-coumaroylrutinoside)-5-O-glucoside，PRG）。以往关于黑果枸杞的综述主要涵盖其化学成分、生物活性和工业应用；相比之下，本综述提供了一份深入、系统的概述。本综述以PRG生物合成的基因组调控、基于体外消化试验推断的潜在结肠可利用性以及沿肠道免疫轴对肠道免疫的调节作用为逻辑主线，描绘了一个涵盖结构、生物功能和作用机制的连贯框架。本综述首先阐述了PRG生物合成的基因组和转录调控，为高PRG含量品种的分子育种奠定理论基础。研究人员阐明了PRG和黑果枸杞花色苷粗提物（Lycium ruthenicum anthocyanin crude extracts，LRA）调节肠道免疫稳态的多层次机制：重塑肠道菌群组成、增强肠道屏障完整性以及平衡黏膜免疫。随后，本综述讨论了PRG对代谢综合征、结肠炎和神经炎症的肠道系统性调节作用，并阐明了它们之间的功能差异。最后，本综述探讨了PRG临床转化面临的挑战，包括药代动力学不明确、临床证据有限以及肠道菌群组成的个体间异质性，并提出了一个基于机制的、整合多组学、合成生物学和按菌群特征分层的临床试验的研究议程。最终，本系统综述将LRA和PRG重新定义为具有潜在结肠可利用性的有前景的营养干预制剂，并为其在功能性食品和免疫代谢疾病辅助治疗中的应用提供了理论框架和路线图。
1. 引言
黑果枸杞是一种传统藏药草本植物，在中国西北高海拔地区被广泛栽培和利用。古代医药文献记载其果实用于治疗心热病、心血管疾病和月经紊乱。其果实含有丰富的花色苷，其中矮牵牛素-3-O-(反式-对-香豆酰基芸香糖苷)-5-O-葡萄糖苷（PRG）被鉴定为其特征性酰基化花色苷，PRG含量占干重（DW）的0.829%至3.151%。PRG在pH 7-9时保持稳定的蓝紫色调，使其成为食品工业应用中具有前景的天然蓝色着色剂。
酰基部分通过空间位阻和疏水相互作用保护花色苷苷元，使黑果枸杞的酰基化花色苷比非酰基化对应物具有更优异的理化稳定性。基因组研究表明，MBW转录复合物调控PRG的生物合成。高海拔地区的紫外辐射和干旱胁迫通过UVR8–HY5信号级联诱导花色苷积累，构成黑果枸杞在恶劣高山环境中生存的核心适应策略。
多组学方法的进展极大地促进了黑果枸杞总花色苷（LRA）和单体PRG免疫调节功能的机制研究。PRG独特的反式酰基化骨架赋予其改善的分子稳定性，使其能够调节宿主免疫稳态和肠道菌群组成。基于体外稳定性数据，PRG比非酰基化花色苷表现出更大的胃肠稳定性，支持其潜在的结肠递送能力。累积的药理学证据已证实LRA具有神经保护作用，并能恢复溃疡性结肠炎中受损的肠道屏障功能。与传统非酰基化花色苷相比，PRG在纠正异常的Th1/Th17免疫应答方面表现出优异的功效。然而，三个关键瓶颈阻碍了当前研究：PRG在体内的代谢命运和免疫识别机制仍不明确；连接花色苷、肠道菌群和宿主免疫的三方交互网络仍未被充分理解；稀缺的临床试验数据限制了临床制剂的转化开发。
为弥补这些空白，本综述系统总结了以酰基化结构基序的功能重要性为中心已发表的发现，强调了PRG作为高价值膳食生物活性成分的转化潜力，并为未来功能性食品和辅助治疗产品的开发提供了理论基础。
本系统综述根据PRISMA基本指南进行。研究人员系统检索了PubMed、Web of Science和Google Scholar，时间从建库至2026年3月10日。检索字符串结合了以下自由词：Lycium ruthenicum、anthocyanin、PRG、biosynthesis、extraction、gut microbiota、immunomodulation、in vivo experiment和clinical trial。仅保留以英文发表的同行评审原创文章和综述；会议摘要、非英文文章以及检查不相关主题的文章被排除。识别到的记录导入EndNote，使用自动去重后进行手动检查去除重复项。两位作者随后筛选标题和摘要，然后是全文，并通过共识解决分歧。最终，涵盖基因组研究、提取技术、体外试验、临床前动物研究和有限的人体临床试验的78篇符合条件文章被纳入综述。下文分别讨论了不同研究层面的证据，以防止临床前发现的过度外推。
2. 黑果枸杞花色苷生物合成的基因组基础和调控网络
2.1. 黑果枸杞花色苷多样化和育种潜力的基因组学见解
最近的基因组学进展为黑果枸杞花色苷生物合成的遗传基础提供了前所未有的见解。其遗传蓝图已被绘制，揭示了一种有利于积累特定花色苷（如PRG）的进化策略。一个端粒到端粒（T2T）基因组组装（2.26 Gb）揭示了驱动代谢特化的序列景观和进化机制。约465万年前的全基因组复制（WGD）事件可能促进了花色苷生物合成中结构基因（如LrCHS（查尔酮合酶）和LrDFR（二氢黄酮醇4-还原酶））的功能分化。此外，12号染色体上LrF3'5'H（类黄酮3'5'羟化酶）基因簇的串联扩增提示了增强类黄酮生物合成和PRG积累的潜在机制。然而，WGD/基因扩增与PRG生物合成之间的因果关系尚未得到实验验证。
控制花色苷积累的调控变异的鉴定加速了基因组资源向育种应用的转化。LrAN2启动子中的一个关键SNP（单核苷酸多态性）（g.1854723 A > G）可将其表达改变高达4.80倍，强调了顺式调控变异在色素积累中的重要性。这一发现使得开发靶向LrAN2的共显性标记得以实现，可区分来自中国西北的24份黑果枸杞和30份宁夏枸杞种质。值得注意的是，AN1基因启动子的删除为区分黑果枸杞黑色、白色和紫色变种的功能标记提供了新的关键靶标。这些分子发现为标记辅助选择奠定了基础，促进了高花色苷性状的优先渗入。尽管对PRG积累有了基因组学见解，实际应用仍需解析驱动PRG生物合成的特定代谢步骤和调控网络。这些基因组观察结果在很大程度上市相关的，需要在PRG代谢背景下进行功能遗传学验证。
2.2. 花色苷生物合成的代谢途径和调控
PRG生物合成是一个高度协调的代谢级联反应。它始于苯丙烷途径前体，通过LrCHS和LrCHI（查尔酮黄烷酮异构酶）等酶的催化添加到类黄酮骨架上。一个关键分支点由LrF3'5'H主导，这是一种关键的三羟化酶，将代谢流导向二氢杨梅素生物合成。这一步建立了PRG合成所必需的B环三羟化，因为飞燕草素（源自二氢杨梅素）是PRG的直接前体。飞燕草素通过LrDFR（二氢杨梅素到无色飞燕草素）和LrANS（花色素合酶，无色飞燕草素到有色花色素）的依次催化生成，这一过程支撑了黑果枸杞的特征性色素沉着。
随后的修饰反应，例如通过Lr3GT（花色素3-O-葡萄糖基转移酶）、Lr5GT（花色素5-O-葡萄糖基转移酶）和Lr3RT（花色素3-O-鼠李糖基转移酶）的依次糖基化，以及进一步的结构调整，特别是由底物特异性酰基转移酶LrACT（花色素酰基转移酶）介导的反式-对-香豆酰化，以及由LrA3'5'MT（花色素3'5'-甲基转移酶）催化的甲基化。这些结构基因在果实转色期协调表达，表明存在一个时间调控网络。这种协调性实现了代谢流控制，并为代谢工程策略提供了分子参考，特别是通过在关键阶段调节关键酶（如LrACT）的表达来富集PRG。PRG最终的液泡隔离由LrTT12（transparent testa 12）转运蛋白介导，确保其积累和稳定性。这些关于修饰特异性和时间调控的见解为优化黑果枸杞花色苷组成的育种策略提供了理论基础。PRG生物合成依赖于一个精细的转录调控系统。
2.3. MBW复合物对花色苷生物合成的转录调控
MBW复合物调控黑果枸杞的花色苷生物合成，其中R2R3-MYB转录因子LrAN2是其核心调控组件。转录组分析表明，LrAN2表达在果实成熟期达到峰值，与其激活花色苷生物合成的角色一致。转基因试验证实，过表达LrAN2可促进毛状根和烟草系统中的花色苷合成。在系统发育上，LrAN2与SjAN2和StMYB113等花色苷调控因子聚类，它们是AtPAP1的直系同源物。LrAN2包含保守的功能结构域，包括用于bHLH（碱性螺旋-环-螺旋）相互作用的N端R2R3基序、C端酸性激活结构域，以及决定特异性的ANDV和KPRPRTF基序，这些共同实现了优先转录控制。
MBW复合物的调控完整性取决于其组件间的协调相互作用。LrAN1b启动子中一个229 bp的缺失（LrAN1b编码核心bHLH伙伴）彻底破坏了白色果实变种中的花色苷积累，证明了每个复合物成员的功能必要性。此外，另一个bHLH调控因子LrJAF13似乎有助于LrAN1b的表达。此外，WD40蛋白LrAN11稳定了MYB-bHLH相互作用。这种多层次结构表明了一个稳健且精确调控的系统，其中MBW组件的动态组装和化学计量确保了该物种花色苷生物合成的时空控制。除内在转录控制外，黑果枸杞还整合环境信号来调节花色苷生物合成。这一机制促进了生态适应和PRG积累，将在第2.4节讨论。
2.4. 花色苷生物合成的环境调控和生态型适应
黑果枸杞进化出精细的机制，将多样化的环境信号整合到花色苷生物合成的调控中。盐胁迫触发盐过度敏感（SOS）通路，导致CPK28（钙依赖性蛋白激酶28）介导的关键转录因子LrAN2磷酸化，增强其稳定性并延长转录活性。同时，UV-B辐射通过UVR8-HY5信号级联激活互补通路，其中LrHY5结合LrAN1b启动子以增强其表达。其他调控层涉及ABA（脱落酸）信号和蓝光/蔗糖协调，通过不同的顺式元件调节特定MYB调控因子的表达。这种多层次调控架构有助于响应复杂环境线索选择性调整花色苷生物合成。
黑果枸杞自然种群展示了这种调控可塑性如何转化为生态适应。高地种群的PRG含量高于低地种群，这种表型差异与基因组变异相关，包括光响应基因（如LrHY5）的拷贝数扩增。这一观察表明，环境压力通过选择调控组件塑造了花色苷通路的遗传架构。诱导的花色苷积累也可能有助于交叉胁迫保护，如LrAN2过表达植物中镉耐受性增强所示。这些见解为制定利用自然遗传变异同时提高花色苷含量和环境适应性的分子育种策略奠定了基础。
3. LRA的分离、提取和结构表征
3.1. 黑果枸杞花色苷的先进提取技术
LRA提取已从常规溶剂方法发展到先进的物理和生物技术方法。常规乙醇提取（70%乙醇，28分钟）产生的花色苷提取率为7.12% ± 0.093% DW。热水提取（50°C，30分钟）的提取率为48.30% ± 3.25% DW，而1.50%（w/v）果胶酶辅助提取给出了最高提取率73.60% ± 1.65% DW。物理方法，包括超声辅助提取和液相脉冲放电，缩短了处理时间同时保持了可接受的产率，后者在8分钟内使用20%乙醇达到95.69%的回收率。现代绿色技术包括酶解、超声提取和超临界CO
2提取。其中，酶解实现了19.51 mg/g DW（相当于1.951% DW）的高PRG含量，同时保持结构完整性。这种方法比微波辅助、超声辅助和热水提取更好地保持了原始PRG比例。结构保存至关重要，因为PRG的酰基部分与其生物活性密切相关。
组合策略，如超声-微波集成系统或超声-酶解系统，旨在平衡提取效率、结构稳定性和实际可行性，通过克服单一方法的局限性并改善整体工艺经济性。干燥条件也影响产品质量；冷冻干燥比热风干燥保留约2.30倍更多的酰基化花色苷。基于环糊精的提取可以增强回收率和稳定性，但受限于大规模使用的高成本。尽管这些方法提供了高产品纯度并保持了结构完整性，但其较差的成本效益限制了它们适用于高价值而非大规模应用。超临界CO
2提取仅产生0.0645 mg/100 g DW的PRG（相当于0.0000645%），显著低于酶解。在生物学上，它产生高纯度PRG，无酶残留，适合实验室药理学研究。在经济上，高设施和运行成本目前限制了其大规模工业应用。
3.2. PRG的纯化和结构表征
LRA纯化需要有效分离影响产品质量的共提取化合物，如糖类和蛋白质。大孔树脂代表主要的初始纯化策略；AB-8树脂通过疏水和氢键相互作用产出总花色苷的76%，而D-101树脂产生中等纯度（25.3%），突出了商业树脂之间较大的性能差距。使用XAD-7HP树脂结合半制备HPLC（高效液相色谱）的序贯纯化实现了98.30%的纯度，代表了一个关键突破。因此，更高分辨率的方法日益受到青睐，制备型HPLC被广泛用于PRG纯化，达到卓越的纯度（98.50%）并保持85%以上的回收率，解决了精确分离包括PRG在内的生物活性单体而不发生结构降解的迫切需求。
结构表征已通过创新的色谱和质谱方法取得显著进展。混合模式色谱（XCharge C8SAX）已能够分离六种不同的花色苷单体。然而，RPLC/HILIC组合系统对PRG分析更有价值，因为它们可解析质量差异极小（Δm/z = 0.50 Da）的PRG顺反异构体，鉴于异构体结构影响PRG的稳定性和生物活性，这是一个关键优势。现代质谱，特别是UHPLC-Q-Orbitrap系统，极大地扩展了对LRA的理解，鉴定出45种花色苷（包括21种矮牵牛素和10种锦葵素衍生物）。当前方法仍面临挑战：区分PRG类似物中细微的酰基取代需要更先进的串联质谱碎裂策略。尽管存在这些局限性，本综述为LRA分离和系统结构测定建立了全面的技术框架。未来研究应侧重于提高针对PRG的纯化和表征的特异性和可扩展性。
3.3. PRG稳定性和生物活性的结构基础
高分辨率质谱已确认PRG的分子式（C
43H
49O
23+）并通过特征性碎裂模式鉴定了关键结构组件（如芸香糖基部分和对香豆酰基）。核磁共振波谱已确认酰化位点位于芸香糖基部分内鼠李糖单元的4-OH位置，这一特定结构特征支撑了PRG众所周知的稳定性。通过形成"夹心"结构防止C-2水合反应，通过促进花色苷核与芳香环之间的分子内堆积提高了多酰基花色苷的稳定性。越来越多的证据表明，这种稳定性源于分子内辅色作用和黄烊阳离子的空间保护，这些机制减轻了花色素骨架在生理条件下的自发降解。
PRG的反式-对-香豆酰化结构赋予其独特的理化和生物学特性，使其区别于大多数非酰基化花色苷。约50%的PRG在中性pH下保持完整，并显示出比非酰基化类似物更高的热稳定性。PRG在pH 4和10°C条件下暴露60天后保留84%的完整性，而花青素-3-O-葡萄糖苷完全降解。这种结构韧性可能转化为体内独特的药代动力学特征。与非酰基化花色苷在上消化道易被降解不同，体外数据表明一些PRG可能抵抗消化分解。第4.1节描述了相关定量信息。这种由酰化赋予的结构稳定性可能使PRG能够与肠道菌群相互作用，潜在地调节其生物活性和免疫调节潜力。
此外，圆二色光谱揭示了PRG的构象依赖性生物活性，反式异构体表现出比顺式异构体显著更高的TLR4结合亲和力。这种差异归因于反式构型与TLR4结合口袋的空间相容性，因为分子构象影响配体与受体之间相互作用的效率。这些发现提出了一个连接PRG结构与功能的统一框架：其位点特异性反式-对-香豆酰化通过分子内辅色作用和空间位阻提高了理化稳定性，同时驱动潜在的结肠可利用性以加强与肠道菌群的相互作用。相比之下，体外细胞试验表明PRG可能结合TLR4并抑制下游NF-κB（核因子κB）通路。然而，分子结合的直接验证目前尚缺乏。这一综合视角强调了PRG的结构特征作为调节其跨物种功能转化的潜在分子开关，为理解植物来源的花色苷如何在人体中发挥生物学效应提供了理论框架。
3.4. PRG积累的代谢调控和种质资源评价
近期对黑果枸杞代谢调控的研究揭示了花色苷与其他次生代谢物之间的协调积累模式。发育代谢组学分析表明特定花色苷与亚精胺衍生物之间存在强正相关性（R > 0.9），提示苯丙烷和多胺通路的潜在共调控，可能由共享的糖基转移酶（如HG27071）介导。分析灵敏度的同步提高使得这些化合物的定量成为可能，当前检测限达到0.10 ng/mL。环境因素，特别是通过UVR8-COP1-HY5信号轴的紫外辐射，似乎在高海拔环境中增强花色苷的结构修饰，可能解释了观察到的花色苷谱的地理变异。
对从中国西北四省（青海、甘肃、宁夏和新疆）采集的72份野生黑果枸杞种质进行了综合评价，以探索PRG积累的自然变异并鉴定优良遗传资源用于育种。其中，来自青海省柴达木盆地的野生种质表现出最大PRG含量15.46 ± 1.54 mg/g DW（1.546% ± 0.154% DW），显著高于宁夏（0.987% ± 0.092% DW）。对黑果和白果黑果枸杞花色苷的HPLC-DAD分析进一步确认了PRG是黑果种质中的主要花色苷成分，而白果种质仅含有少量PRG。这一全面的种质特征描述确认了PRG是黑果枸杞中的主要花色苷。它为种质资源保护策略和鉴定育种计划中的优良遗传资源提供了科学基础。野生种质与栽培品种"青海1号"之间PRG含量的最小差异进一步支持了通过选择育种开发高花色苷品种的潜力。
总之，从文献中浮现出对PRG的系统性理解，从其在植物中的合成到其独特的酰化结构和稳定性。这些特征表明，PRG进入人体后，在富含微生物和免疫细胞的肠道环境中发挥其生理功能。下一节探讨PRG如何调节肠道菌群、增强肠道免疫屏障，并在肠道微环境中产生调节效应。
4. PRG和LRA调节肠道免疫稳态的潜在分子机制和多系统效应
4.1. PRG通过代谢稳态增强肠道屏障防御
PRG是一种单一纯化的花色苷，具有相对特异的作用，而LRA是一种通过多组分协同作用的粗提物。因此，它们的机制不能直接比较。尽管粗LRA提取物和分离的PRG对肠道屏障的保护作用相关，但由于其成分不同，其机制有所不同。
PRG的结构特征，特别是其酰基部分，深刻塑造了其胃肠行为及随后与肠道生态系统的相互作用。对香豆酰基赋予的增强疏水性和稳定性延长了PRG在上消化道的通过时间并抵抗降解，导致最大血浆浓度出现在6-8小时，远晚于非酰基化花色苷报道的1-2小时。在体外模拟胃肠消化后，71.8%的PRG保持结构完整，因此可能可用于递送至结肠腔；这一估计尚未在体内得到验证。
在结肠中，PRG可用于广泛的微生物代谢和与肠道黏膜免疫系统的直接相互作用。酰化结构赋予的稳定性似乎也促进了生物活性酚酸（如对香豆酸）通过共生微生物（如双歧杆菌和乳杆菌）产生的细菌酰基水解酶持续释放。在DSS（葡聚糖硫酸钠）诱导的小鼠结肠炎模型中，PRG调节了肠道群落组成和功能。类似地，在HFD（高脂饮食）诱导的小鼠肥胖模型中，PRG重塑了肠道菌群结构，降低了厚壁菌门/拟杆菌门比率，增加了紫单胞菌科、理研菌科和普雷沃氏菌科的相对丰度，并降低了乳杆菌科、链球菌科、瘤胃菌科和丹毒丝菌科的相对丰度（直接证据）。此外，有益益生菌乳杆菌在用PRG治疗的DSS诱导结肠炎小鼠中占主导地位。相关动物研究报告了PRG干预后这些微生物丰度的不同程度变化（关联性推断），并促进了健康相关微生物群结构的恢复。
这些微生物变化与代谢变化相关，特别是增加短链脂肪酸（SCFA）产生（如丁酸）和胆汁酸组成的有利变化。一项关于粗LRA提取物（以PRG为其主要成分）的独立体内研究进一步量化了丁酸升高和相应的微生物变化，报告结肠丁酸水平（μmol/g）分别为20（对照）、6（HFD）和18（HFD+花色苷）；罗斯氏菌属丰度（%）分别从2.20变为0.40再变为1.80。丁酸还抑制衰老和促炎SASP因子，如IL-6和IL-8。在肥胖模型中，这些有益的微生物变化伴随着血清脂多糖（LPS）水平和全身炎症的显著下降。值得注意的是，抗生素耗竭肠道菌群可能减弱PRG的抗炎作用，强调了微生物代谢在介导该化合物生物活性中的关键作用。然而，PRG是直接作用还是通过微生物代谢物起作用仍不清楚。粪菌移植（FMT）研究结果支持肠道菌群的潜在因果作用：接受PRG调节的菌群的受体表现出改善的代谢参数和屏障功能，模拟了PRG的直接效应。尽管当前关于FMT的证据支持肠道菌群参与PRG的生物活性，但可用的研究设计无法区分三个潜在来源的贡献：可移植的活细菌、移植后产生的肠道微生物代谢物以及供体粪便中携带的未代谢残留PRG。需要进一步的实验来阐明它们各自的作用。上述结论来自使用PRG的体内动物实验，提供了直接的实验证据。
粘蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila）对PRG的显著响应暗示了一种独特的生态相互作用。基于相关的结构数据，PRG似乎作为假性铁载体促进其增殖；然而，这一假设尚未得到实验验证。与传统益生元机制不同，它提出了一种精细的微生态相互作用：PRG的金属螯合能力可能对肠道菌群施加选择压力，从而促进适应性微生物（如粘蛋白阿克曼菌）的增殖（推测性假设）。
这些PRG诱导的微生物和代谢修饰有助于恢复DSS结肠炎模型中的肠道屏障完整性，如紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin和Claudin-1）恢复到接近正常水平所示。PRG在肥胖模型中通过上调ZO-1、Occludin和Claudin-1的表达增强肠道屏障，降低肠道通透性并减轻代谢性内毒素血症（直接证据）。这一证据显示了PRG通过代谢调节支持胃肠稳态的多方面机制。
4.2. LRA增强肠道屏障功能的多靶点作用
LRA通过协调的多层次作用增强肠道屏障完整性。在分子水平上，它增加了关键紧密连接蛋白（occludin、ZO-1和claudin-1）的表达，并在DSS诱导的结肠炎中将其水平恢复到接近正常（直接证据）。这些分子变化对应于屏障完整性的功能改善，表现为肠道通透性降低和全身内毒素水平降低，疾病活动指数（DAI）评分改善，结肠长度增加，这些都是增强屏障保护的功能相关性，表明LRA减轻了结肠炎症状。PRG通过上调紧密连接蛋白的屏障保护作用在第4.1节中有详细描述。
LRA的保护作用不仅限于上皮紧密连接，还包括增强黏液层完整性。在八眉三元猪中，LRA增加了肠道黏液厚度、MUC2（黏蛋白2）分泌和杯状细胞数量。这些肠道改善与全身性益处相关。在高果糖饮食诱导的神经炎症模型中，LRA干预减轻了炎症介质从循环向中枢神经系统的转移，同时增强了血脑屏障完整性标志物的表达（直接证据）。这些观察表明，其增强肠道屏障的特性可能通过肠脑轴有助于更广泛的生理稳态。增强的肠道屏障支持粗LRA提取物和PRG的免疫调节活性，其抗炎和免疫耐受机制在第4.3节中描述。
4.3. LRA和PRG的双向抗炎和免疫耐受协同机制
本节讨论LRA和PRG的抗炎和免疫调节机制。它介绍了粗LRA提取物的多通路调节作用，这是一种具有潜在结肠可利用性的有前景的营养干预制剂。
LRA通过多种信号通路和细胞群体协同调节免疫功能。实验证据表明，它们通过干扰关键信号级联来减弱促炎反应，包括抑制NF-κB p65的核转位和下调TLR4/MyD88的蛋白表达。它还增强细胞抗氧化防御能力（直接证据），可能通过其协同效应介导。
相比之下，PRG和LRA通过不同的途径调节炎症。PRG是一种具有明确调控通路的单一单体，而LRA通过其组分间的协同作用发挥效应。没有使用匹配剂量的实验比较确认这两种方法的相对功效。PRG的酰化结构增强了分子稳定性，并可能优化与免疫受体（如TLR4）的结合，从而在抑制关键炎症通路（如TLR4/NF-κB）方面表现出显著功效。在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中，PRG和粗LRA提取物在其各自的实验设置下显示出不同的响应特征；然而，它们缺乏相同的剂量和分组来进行直接的优势比较。PRG下调促炎细胞因子并降低肠道中的LPS水平、TLR4磷酸化和NF-κB p65磷酸化，并降低循环中的促炎细胞因子水平（关联性推断）。它还激活了不同的信号通路，如JNK-1磷酸化，这一特征将其与LRA的多通路协同区分开来。这些效应反映了PRG单体的独立性，应与LRA的整体效应区分开来。
除了减弱炎症外，LRA还通过调节特定细胞群体促进免疫耐受的建立。在炎症性肠病的实验模型中，LRA和多糖的联合治疗显示出协同效应，对免疫参数的调节作用强于任一单独组分。这一证据反映了LRA中的多组分协同作用，与PRG单体的特异性作用模式形成对比。
总之，LRA粗提取物通过多通路炎症抑制和Treg（调节性T细胞）介导的免疫耐受的平衡策略维持免疫稳态。作为LRA中的核心生物活性成分，PRG显示出与LRA多组分协同作用不同的单组分调控模式。两者之间的机制差异源于协同混合物与单一单体的固有性质。
4.4. LRA/PRG通过肠道免疫轴调节的全身健康影响
文献通过肠道免疫轴的视角描述了LRA和PRG对全身健康的调节作用，强调了功效和机制的差异。尽管PRG已在多种疾病模型中显示出益处，但仍不确定这些反映的是统一机制还是每种疾病特异的调控。因此，研究人员在下面区分了LRA和PRG的常见上游响应和背景特异的下游响应。
LRA通过多系统协同表现出改善代谢疾病的巨大潜力。在代谢疾病模型中，LRA改善了胰岛素敏感性并调节了脂肪生成因子（SREBP-1c和FAS）的表达。其对全身代谢紊乱的有益作用依赖于多靶点策略。在肝脏中，LRA协同抑制TLR4/NF-κB/JNK炎症通路并激活Nrf2/HO-1抗氧化通路，炎症和氧化应激是代谢疾病病理学的两个核心。此外，它降低促炎细胞因子水平（TNF-α和IL-6）并增强抗氧化酶活性（SOD和GSH-Px），恢复下游IRS-1/AKT胰岛素信号通路（直接证据）。
相比之下，PRG通过一种独特的以肠道为中心的机制发挥全身益处。其酰基化骨架赋予药代动力学特性，使其能够抵抗胃肠降解并在肠道外发挥作用，可能到达结肠腔并与肠道菌群相互作用。这一结构特征支撑了归因于PRG的全身效应。PRG富集有益细菌（如异杆菌属），抑制促炎类群，并通过上调紧密连接蛋白修复肠道屏障，有效阻断代谢性内毒素血症的启动（关联性推断）。
PRG的这种肠道起始的全身调节模式进一步得到神经保护证据的支持。PRG与抑制小胶质细胞活化和改善认知功能相关，可能通过减少全身内毒素暴露介导。在d-半乳糖诱导的小鼠全身衰老模型中，PRG在多个器官和组织中发挥保护作用。值得注意的是，它改善了认知功能，增强了肝脏和肾脏的抗氧化能力（降低MDA并增加SOD和GSH-Px活性），并通过下调NF-κB、COX2和iNOS抑制神经炎症（直接证据）。在秀丽隐杆线虫中，PRG调节肠道微生物组成以赋予抗衰老益处。因此，证据显示了PRG在不同模型中的明确机制通路：它通过改善肠道微环境和减少全身炎症及氧化应激来维持远端器官（如大脑）的功能。这一机制特征与LRA的直接调节模式形成对比，LRA同时调节代谢组织（包括肝脏）内的多种通路（关联性推断）。
PRG和LRA的全身效应可能部分归因于它们对肠道微生物生态和免疫细胞分化的影响。跨多个物种的研究表明，LRA持续增加有益细菌的丰度，如双歧杆菌和产丁酸的粪杆菌属。这些微生物变化伴随着免疫细胞群体的调节和调节性T细胞分化的增强；PRG抑制Th1/Th17细胞介导的促炎反应并抑制STAT1/STAT3信号通路的激活，表明免疫应答向免疫耐受的再平衡。这些相互关联的效应（涵盖微生物组成、免疫细胞动态和全身炎症）赋予LRA和PRG作为改善代谢和免疫功能障碍的功能性膳食成分的显著潜力，通过不同的机制（LRA的多位点协同 vs. PRG以肠道为中心适度调节的初步能力）。
这些多系统发现的汇聚强调了肠道免疫轴作为花色苷介导干预的关键调节枢纽。这种跨系统的调节效应强调了LRA和PRG的临床潜力。潜在的免疫细胞相关机制在第4.5节中进一步讨论。
4.5. 酰基化结构介导的免疫细胞调节和多系统调控
应从两类物质中区分PRG的分子身份和功能特征：来自其他物种的花色苷提取物和LRA。这种结肠递送倾向仅从结构特征和体外发现推断，这些共同表明对免疫细胞的潜在调节作用而非高度特异性靶向。这两个功能相互关联，但不同于粗提取物的广谱协同效应。这一事实是我们理解黑果枸杞果实免疫调节价值的核心。
当前细胞研究表明，PRG可能在启动和激活两个阶段调节NLRP3炎性小体，而相关的体内动物验证仍不充分（关联性推断）。酰化作用通过促进花色素苷元与芳香环之间的分子内堆积形成"夹心"结构，增强花色苷的稳定性并调节与免疫受体的相互作用。在启动阶段，PRG增加TLR4结合亲和力，从而阻断TLR4/NF-κB通路并减少促炎细胞因子前体，如pro-IL-1β前蛋白。在激活阶段，它调节细胞内ROS（活性氧）的产生并抑制钾外流，阻止NLRP3炎性小体的组装和激活，这已通过PRG的直接实验验证。PRG和LRA的作用模式似乎不同。现有数据表明不同的调控通路，且未报道比较PRG和LRA的相同剂量平行实验用于细胞代谢。尽管从越橘提取的非酰基化花色苷（NAAB）和从紫薯提取的酰基化花色苷（AAPP）也发挥抗炎作用，但它们依赖于多种酰基化花色苷和酚类物质的协同作用，而非像PRG这样的单一单体靶向特定通路（关联性推断）。
PRG的酰化结构能抵抗胃肠酶的降解，通过整合肠道、免疫和代谢调节实现多系统调控，以肠道菌群为中心枢纽。PRG补充改善肠道紧密连接也在第4.1节中总结。这些肠道菌群变化诱导全身代谢改变。例如，它们导致支链氨基酸（BCAAs）水平降低和免疫调节代谢物（如马尿酸）血浆水平增加。这些变化改善了葡萄糖稳态并促进了Treg分化，从而增强免疫耐受。相比之下，紫薯AAPP的代谢调节集中于肝脏通路（推测性假设），而越橘NAAB由于其稳定性差而很少到达结肠。LRA依赖于多组分协同效应而非单体调控，在没有标准化比较试验的情况下，其整体效果不能直接判定为较差。
尽管当前证据证实了PRG酰化结构的免疫调节特性，但仍存在三个关键问题。首先，酰化决定了PRG的稳定性、结肠调节和后续功能。PRG的反式香豆酰化结构不同于非酰基化花色苷（如花青素-3-葡萄糖苷）和其他酰化变体。PRG是黑果枸杞的特征性酰基化花色苷，以其独特的侧链部分而著称。源自不同植物物种的酰基化花色苷表现出不同的调控特征和代谢谱。其次，PRG是解析单组分机制通路的有价值候选者，因为LRA通过多组分协同作用，且没有统一比较数据确认任一种形式的优越性，前者更有利于解析酰化结构的独立功能。第三，反式-对-香豆酰基既是稳定性增强剂又是功能介体，这一特性不被其他酰基取代或非酰基化花色苷所复制。因此，未来研究应使用标准化比较实验（即相同剂量和模型）量化PRG与其他酰基化花色苷之间的差异。此外，需要进行临床研究来验证PRG在人体中的代谢通路，并阐明肠道菌群代谢物与PRG在肠道免疫调节活性和膳食应用中的协同机制。
与具有不同酰基侧链的其他酰基化花色苷相比，PRG具有独特的反式-对-香豆酰基，改变了其稳定性、胃肠耐受性和肠道趋向性，从而产生不同的生物活性。然而，其功能优越性仍有待通过统一的、相同剂量的平行动物实验确认，支持证据仅来自文献中的间接比较。在肥胖、结肠炎、神经炎症和衰老模型中，PRG对肠道屏障功能、肠道菌群和NF-κB/NLRP3信号级联发挥核心调节作用。然而，下游通路因不同疾病条件而异：它在肥胖中主要调节脂质代谢，在结肠炎中调节肠道免疫，在神经炎症中调节中枢小胶质细胞。此外，当前证据未揭示这种功能分歧是源于PRG固有的生物学特性还是不同疾病间的异质性病理特征。因此，未来研究应使用标准化平行试验检查这一区别。
5. 从临床前证据到临床转化：PRG的挑战和路径
5.1. 现有临床证据的间接性和外推限制
评估PRG作为人类干预措施的随机对照试验（RCTs）仍然极为稀少。大多数临床证据来自蓝莓和黑加仑等来源的非酰基化花色苷研究
