富集原代培养揭示大鼠睾丸 Telocyte 的形态异质性

《Cells》：An Enriched Primary Culture Reveals Morphological Heterogeneity of Rat Testicular Telocytes

　　

Telocyte（TC，以小细胞体和称为 Telopode 的长胞质突起为特征的间质细胞）是间质细胞，以小细胞体和称为 Telopode 的长而细的胞质延伸为特征。尽管已在大鼠睾丸间质中被鉴定，但其分离和体外富集的标准化方案尚未建立。本研究旨在建立大鼠睾丸 Telocyte 的富集原代培养模型并表征其体外形态。研究人员从成年雄性 Wistar 大鼠睾丸经酶解分离细胞，经短期差速贴壁培养，并基于 CD34 阳性/CD31 阴性谱型进行荧光激活细胞分选（FACS），同时经验性排除 αSMA 相关区域事件以减少 PTMC（Peritubular Myoid Cell，管周肌样细胞）样污染。分选后 CD34 免疫反应性、可检测 CD31 免疫反应性缺失及特征性形态支持该分选组分被解释为 Telocyte 富集。光镜显示反复的星状、双极、致密分支、链状及密集网络形成模式。部分细长胞质突呈串珠状，交替细段与局灶膨大。结果证明富集群体内存在培养相关的形态异质性，并为分离与光镜表征提供方法学框架。未来需扩展分选后表型分析（含 PDGFRα 与 Vimentin）及超微结构验证。

研究背景方面，精子发生与类固醇生成依赖睾丸微环境精密的细胞间通讯，Telocyte 作为间质基质细胞，以小细胞体和长 Telopode 参与组织结构与信号调控，在包括大鼠在内多种物种睾丸间质中被描述，但其体内功能未明。当前睾丸细胞分离多依赖酶解与差速贴壁或密度梯度，难以从形态相近的成纤维样细胞与 PTMC 中高纯度分离 Telocyte，且缺乏标准化富集方案，阻碍机制研究。鉴于此，研究人员开展本研究以建立大鼠睾丸 Telocyte 富集原代培养并系统描述其体外形态异质性。

主要关键技术方法包括：样本来自机构繁殖群盈余的成年雄性 Wistar 大鼠（Rattus norvegicus domestica，n=20），安乐死后取睾丸；经酶解（胶原酶 II）获单细胞悬液，DMEM/F12 加 10% FBS 中差速贴壁 2 小时去除快速贴壁成纤维样细胞，续培养 72 小时；流式分选采用 CD34 阳性选通、经验性排除 αSMA 相关荧光区域（活细胞未透膜，仅作操作性能耗减步）、排除 CD31 阳性内皮细胞，得 CD34⁺CD31^? 富集份；分选后行 CD34 与 CD31 免疫荧光及光镜形态分析。

研究结果部分，3.1 节显示经酶解、短培与 FACS 获 CD34⁺CD31^? 份，分选后免疫荧光示 CD34 在细胞体及 Telopode 阳性、CD31 阴性，支持 Telocyte 富集解释。3.2 节光镜示培养细胞具小卵圆/梨形/伸长/星状细胞体，长细 Telopode 常呈串珠状（薄段 Podomer 与局灶膨大 Podom 交替），并与周围宽浆扁平 PTMC 样细胞可区分，证实富集非全纯。3.3 节记录反复形态模式：星状多辐射、双极伸长、致密分支、链状与局部疏松网络、密集网络形成；同场中可见孤立与互联态并存，证明体外培养相关形态异质性，而非预设体内亚群。

讨论部分指出，该富集策略首次报道用于大鼠睾丸 TC，CD34⁺CD31^? 加 αSMA 相关排除降低 PTMC 样污染，但 αSMA 为胞内蛋白且活细胞未透膜，故该排除仅作经验操作步而非有效 αSMA 表型判定；形态异质性可能反映贴壁铺展、密度与培养塑性，不应推为功能亚群；局限含缺 TEM 超微确认、缺 PDGFRα/Vimentin 扩展表型、未定量残污比例与增殖、无功能实验。结论部分译文如下：本研究提出一种流式辅助策略富集具 Telocyte 一致免疫与形态特征的大鼠睾丸基质群体；经验性 αSMA 相关排除意在降 PTMC 样污染并便利形态评估；体外反复形态模式不可假定为稳定体内或功能特异亚群；缺 PDGFRα/Vimentin 扩展表型、TEM、定量形态与功能实验限制表征完整性，该方案为未来表型、超微、定量与功能研究提供方法基；经进一步验证，此培养模型可作平台研究 Telocyte 与睾丸他细胞互作及雄性腺微环境调控贡献。论文发表于《Cells》。