2 天筛完千万级 B 细胞！微流控技术彻底解决杂交瘤筛选稀有抗体克隆难题

引言

筛选分泌高活性靶向抗体的稀有 B 细胞，是抗体研发的第一步。沿用近 50 年的杂交瘤技术，极易在融合、传代过程中损耗珍贵阳性克隆，并且筛选周期长、漏筛风险高。Fluidic Sciences Cyto-Mine Chroma® 微流控平台以微滴包裹与FRET 荧光检测技术，2 天即可完成全 B 细胞库富集与单细胞分选，全程保护原代细胞活性，为单抗早期筛选提供高效新方案。

Part 01

传统杂交瘤无法规避的 3 大核心痛点

🔵稀有阳性细胞大量丢失

      免疫小鼠淋巴结、脾脏中，能分泌靶标特异性抗体的 B 细胞占比极低。细胞融合、多次传代过程中，大量珍贵分泌细胞损失，直接错过高潜力先导克隆。

🔵筛选通量受限，无法覆盖全部 B 细胞库

      传统手段仅能小批量处理细胞，无法一次性筛查数千万级 B 细胞，天然存在筛选盲区。

🔵实验周期漫长，人力成本高

       从细胞融合到阳性克隆初筛至少耗时 1-2 周，多台设备分步操作，流程繁琐，实验重复性与稳定性较差。

Part 02

Cyto-Mine® 核心原理及流程

整套平台依托微流控生成 450pL 水相微滴，把单个 / 多个 B 细胞独立包裹在微滴内，全程自动化完成五大步骤：液滴生成→细胞孵育→荧光信号检测→阳性液滴分选→成像获得单克隆源性证据并将阳性细胞喷入微孔板。

1. 样本制备简单，细胞无需基因改造

       获取免疫小鼠淋巴细胞后，经低速离心清洗、30μm 滤网去除细胞团块，重悬于专用包裹培养基；按需加入两种 FRET 荧光探针，即可上机检测。包裹培养基也能最大程度保护原代细胞存活。

2. 双模式筛选，两步法高效富集稀有克隆

       依托泊松分布调整细胞稀释浓度，平台支持两种筛选模式，搭建 “先富集、后单克隆” 的两步筛选体系，全程仅 2 天：

第一轮：Fab 供体探针 + Fc 受体探针，细胞分泌 IgG 后形成三元复合物，产生特征荧光偏移，用于第一轮广谱富集；

  

     第一轮富集的细胞总量为3.9x10⁷，阳性细胞占比为0.22%。

第二轮：荧光标记抗原 + IgG 检测探针，仅细胞分泌靶标特异性抗体时才会触发荧光信号，实现精准筛选。两类检测结果均可通过散点图直观圈出阳性细胞群，判读清晰直观。

 

     第二轮富集的细胞总量为421300，阳性细胞占比为0.06%。

Part 03

实测数据：细胞活性稳定，实验可重复

1. 原代 B 细胞全程维持高活力

       初始小鼠淋巴细胞活力 75.4%，经过 Cyto-Mine® 整套筛选流程后仍保留 61% 活性；过夜复苏培养后，细胞活力回升至 65%。微滴水环境温和，无机械剪切损伤，完美适配两轮连续筛选。

2. 方案重复性优异，可作为常规实验流程

       设置 3 组平行单细胞筛选实验，即便未优化的初始实验条件，分选前后细胞活力变化趋势高度统一，证明该筛选体系稳定可靠，可标准化落地为实验室常规筛选手段。

Part 04

总结

杂交瘤技术受限于细胞损耗、低通量短板，早已难以满足当下高通量、高深度抗体筛选需求。Cyto-Mine Chroma®单细胞微滴筛选平台，通过两步法分层筛选、FRET 特异性荧光检测、温和单细胞包裹，实现无遗漏挖掘稀有抗原特异性 B 细胞，兼顾速度、通量与细胞活性，为治疗性抗体先导分子早期发现提供了标准化、可重复的全新解决方案，是单抗研发管线中极具价值的高通量筛选工具。

文末小贴士

本方案目前以小鼠原代 B 细胞筛选为验证模型，平台检测体系具备高度灵活性，可根据不同靶标抗原定制专属 FRET 探针，适配各类抗原特异性抗体筛选场景。