《Transboundary and Emerging Diseases》：Prevalence and Molecular Characterization of Enterocytozoon bieneusi in Horses From Northern and Eastern China: Investigation of Associated Risk Factors and Assessment of Zoonotic Potential
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比氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)是一种威胁公共卫生的人畜共患微孢子虫，尽管人-马接触频繁，但中国关于马科动物感染的流行病学数据仍然匮乏。本研究从覆盖四种饲养模式的中国四个地区采集了412份新鲜马粪便样本，通过巢式PCR(nest
比氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)是一种威胁公共卫生的人畜共患微孢子虫，尽管人-马接触频繁，但中国关于马科动物感染的流行病学数据仍然匮乏。本研究从覆盖四种饲养模式的中国四个地区采集了412份新鲜马粪便样本，通过巢式PCR(nested PCR)筛查E. bieneusi内部转录间隔区(ITS)序列，并进行了风险因素和系统发育分析。总体感染率(infection prevalence)达到15.0%(62/412)，地理分布上从9.7%(温州)到29.3%(齐齐哈尔)不等。<1岁的马驹和公马表现出显著较高的感染风险，粗患病率比(crude prevalence ratio, PR)分别为4.47和2.28，而不同饲养模式间的感染率无统计学差异(p = 0.182)。共鉴定出18种基因型(genotype)：11种已知基因型(D、horse1、Peru8、Type IV、EbpC、CAF1、GX3、HNR-VI、SHWR5、SYSWR18、SYSWR23)和7种新型基因型(HRBM1、KDM1、KDM2、QQHRM1、QQHRM2、QQHRM3、WZM1)。基因型D占主导地位，占阳性分离株的58.1%(36/62)，其次是基因型horse1占14.5%(9/62)和基因型EbpC占3.2%(2/62)。其他八种已知基因型和全部七种新型基因型各有一个分离株。所有七种新型基因型均聚集在人畜共患群1(Group 1)内，本研究鉴定出的除HNR-VI外的所有已知基因型也属于该群。本研究证实了E. bieneusi在中国东部和北部马群中的广泛流行，其流行受地理、年龄和性别因素调节。人畜共患基因型的优势分布表明马可能作为人类传播的潜在储库(reservoir)，为马科动物"同一健康"(One Health)生物安全管理提供了基线流行病学证据。
**论文解读：中国北部和东部马匹比氏肠微孢子虫感染的分子流行病学研究**
**一、研究背景**
微孢子虫(Microsporidia)是隶属于真菌界的单系门类，包含220多个属、1400余种专性细胞内寄生生物，其中至少17种已证实可感染人类。比氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)是感染人类最常见的微孢子虫物种，占全球确诊微孢子虫病(microsporidiosis)病例的90%以上。该病原主要通过粪-口途径经摄入被感染性孢子污染的水或食物传播，其富含几丁质的孢子壁对常规氯化消毒、紫外线照射和常用农业消毒剂具有强抵抗力，可在土壤、地表水和污水中长期存活，从而维持持续的跨物种传播循环。
E. bieneusi具有高度遗传多样性，目前通过核糖体RNA(rRNA)基因高变区内部转录间隔区(ITS)序列分析，已在50多个国家的至少210种动物中鉴定出900余种基因型。系统发育分析将这些基因型分为15个群，其中群1(Group 1)具有最重要的流行病学意义，超过90%的已知人畜共患基因型属于该群。马在全球畜牧生产、文化遗产和马术运动中承担重要角色，与人类保持频繁密切接触。然而，全球仅有8个国家报道过马匹E. bieneusi感染，中国此前仅开展过5次相关流行病学调查，且多局限于单一省份或单一饲养模式，缺乏对放牧、集约化养殖、马术俱乐部和活体动物交易市场等不同模式感染模式的系统比较。为填补这些知识空白，研究人员在中国北部和东部的黑龙江、内蒙古、辽宁和浙江四个省级区域开展了跨-sectional分子流行病学调查。该研究发表于《Transboundary and Emerging Diseases》，提供了中国马匹E. bieneusi感染的基线流行病学数据，深化了对马源分离株人畜共患风险的认识，并为马场和牲畜交易市场的"同一健康"(One Health)生物安全策略提供了科学依据。
**二、研究设计与关键技术方法**
研究人员于2022年10月至2025年10月间，从中国四个省级行政区6个采样点（黑龙江哈尔滨n=142、克东n=46、齐齐哈尔n=41，内蒙古牙克石n=42，辽宁朝阳n=69，浙江温州n=72）共采集412份新鲜马粪便样本，覆盖18个独立马场机构，包括集约化养殖场、自由放牧牧场、马术俱乐部和活体动物交易市场四种饲养/流通系统。关键技术方法包括：粪便样本DNA提取、ITS区域巢式PCR(nested PCR)扩增、阳性扩增产物双向Sanger测序与基因型鉴定、基于邻接法(NJ)和Kimura 2-参数(K2+G)模型的系统发育分析，以及采用Fisher精确检验和Mantel-Haenszel方法进行的统计学分析。
**三、研究结果**
**3.1 马匹中E. bieneusi的感染率**
在412份样本中，62份检测为E. bieneusi阳性，总体感染率为15.0%(95% CI: 11.8%–18.7%)。六个采样点间感染率差异显著(p = 0.021)，其中齐齐哈尔最高(29.3%)，温州最低(9.7%)。年龄与感染状态显著相关(p < 0.001)：<1岁马驹感染率最高(48.3%)，其粗患病率比(PR)为4.47(95% CI: 2.67–7.48)，显著高于>6岁成年马(10.8%)。性别方面，公马感染率(25.0%)显著高于母马(11.0%)(p = 0.001)，PR为2.28(95% CI: 1.43–3.63)。去势状态间无显著差异(p = 0.248)。三种饲养模式间感染率无统计学差异(p = 0.182)，其中自由放牧马群感染率最高(19.4%)，其次为集约化养殖(14.5%)和马术俱乐部(11.6%)；活体动物交易市场马匹感染率为14.9%。
**3.2 E. bieneusi的基因型特征**
全部62份阳性分离株均成功完成ITS基因分型，共鉴定出18种基因型，包括11种已知基因型(CAF1、D、EbpC、GX3、HNR-VI、horse1、Peru8、SHWR5、SYSWR18、SYSWR23和Type IV)和7种新型基因型(HRBM1、KDM1、KDM2、QQHRM1、QQHRM2、QQHRM3和WZM1)。基因型D为绝对优势型，占阳性分离株的58.1%(36/62)，在全部四个省级地区均有检出；基因型horse1位居第二(14.5%, 9/62)。已确认的人畜共患基因型占全部阳性分离株的67.7%。值得注意的是，4种啮齿动物相关基因型(HNR-VI、SHWR5、SYSWR18和SYSWR23)仅在>6岁成年马中检出，且主要分布于环境暴露风险较高的自由放牧和集约化养殖系统，为野生啮齿动物向马群的环境溢出传播提供了初步线索。
**3.3 E. bieneusi的遗传变异**
多序列比对显示ITS序列中存在30个多态性核苷酸位点，以单核苷酸多态性(SNP)为主要变异类型。基因型WZM1存在独特的2-bp缺失(第51-52位)。7种新型基因型与最接近参考序列的核苷酸一致性为97.94%–99.59%。其中HRBM1与全球流行基因型D(ON682482)仅存在1个SNP差异(99.59%一致性)，KDM2与SHH7仅存在1个SNP差异，其余新型基因型与参考序列存在2–4个核苷酸变异。
**3.4 E. bieneusi的系统发育分析**
基于NJ法和K2+G模型的系统发育分析显示，除HNR-VI外，本研究鉴定出的所有已知基因型及全部7种新型基因型均聚集在人畜共患群1(Group 1)内。每种新型基因型均与其最接近的参考基因型形成独立进化分支，进一步支持这些新型基因型可能具有人畜共患传播能力。
**四、讨论与结论**
讨论部分指出，本研究15.0%的总体感染率低于捷克(17.5%)和土耳其(18.7%)，但高于伊朗(11.5%)、哥伦比亚(6
