补体受体C3aR标记IDH野生型胶质母细胞瘤中与生存改善相关的异质性肿瘤相关巨噬细胞状态

《Brain Pathology》：Complement receptor C3aR marks heterogeneous tumor-associated macrophage states associated with improved survival in IDH-wildtype glioblastoma

　　

胶质母细胞瘤（GBM），IDH野生型，是高度侵袭性脑肿瘤，预后差，尽管存在年龄、体能状态和MGMT启动子（MGMT_p）甲基化等既定预后因素，但个体间差异显著。越来越多的证据强调肿瘤微环境（TME）在GBM进展中的作用。补体系统是先天免疫的关键组成部分，可通过产生过敏毒素C₃a并激活其受体C_3aR来影响肿瘤生长和免疫调节。虽然C₃a/C_3aR信号已在多种恶性肿瘤中与不同结局相关联，但其在GBM中的预后意义仍不明确。本研究探讨了人IDH野生型GBM中C_3aR的表达及其与临床病理特征和总生存期的关系。研究人员回顾性分析了114例IDH野生型GBM患者的队列。通过免疫组织化学评估C_3aR表达，并使用数字图像分析进行定量。为探索性目的，采用基于结局的切点将C_3aR表达作为分类变量（C_3aR高表达和C_3aR低表达）进行分析。评估了与临床变量（包括MGMT_p甲基化状态）的相关性。C_3aR表达表现出显著的肿瘤间异质性，并在MGMT_p甲基化肿瘤中富集（p=0.004）。C_3aR高表达肿瘤患者的总生存期改善（log-rank p=0.033）。在包含年龄、体能状态、手术类型和MGMT_p甲基化状态的多变量Cox回归模型中，高C_3aR表达仍与总生存期改善独立相关（HR 0.50，95% CI 0.29–0.87，p=0.014）。组织层面和单细胞分析支持C_3aR与髓系/巨噬细胞区室及异质性巨噬细胞表型的关联。这些发现支持C_3aR表达与IDH野生型GBM异质性巨噬细胞景观之间的关系，而生存关联仍属探索性发现，需独立验证。

胶质母细胞瘤（glioblastoma，GBM）是IDH野生型（IDH-wildtype，IDHwt）成人型弥漫性胶质瘤中最常见且最具侵袭性的类型，即使接受最大范围手术切除并辅以放疗和替莫唑胺化疗，中位总生存期仍仅15–18个月。临床上常用的预后因素包括年龄、体能状态、手术切除程度和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子（MGMT_p）甲基化，但这些因素无法完全解释患者间显著的预后异质性。近年来，肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME）在GBM进展中的作用受到重视，其中肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）可占肿瘤质量的50%，呈现多种激活状态。补体系统是先天免疫的重要组分，其激活产生的过敏毒素C₃a通过受体C_3aR发挥多种生物学效应。已有研究表明C₃a/C_3aR信号在不同肿瘤类型中具有促瘤或抑瘤的双重作用，但其在GBM中的预后意义尚不清楚。此前研究者在较小样本中发现C_3aR主要表达于瘤内巨噬细胞，但转录组数据显示C3AR1高表达与GBM较短生存相关。鉴于上述矛盾，本研究旨在通过免疫组织化学定量检测IDHwt GBM中C_3aR蛋白表达，并系统评估其与临床病理特征及总生存期的关系。该研究发表于《Brain Pathology》。

研究人员回顾性分析了来自法属留尼汪大学医院（CHU de La Reunion）肿瘤组织库（法国政府CRB注册号：DC-2016-145-2860）2018–2024年间诊断的114例IDHwt GBM石蜡包埋样本。采用免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）检测C_3aR表达，并通过QuPath数字图像分析系统对4个高倍视野中的C_3aR阳性细胞进行自动计数。基于结局派生切点（18个阳性细胞）将肿瘤分为C_3aR高表达组和低表达组。在35例患者的组织微阵列（tissue microarray，TMA）上进行C_3aR与巨噬细胞标志物（CD68、HLA-DR、CD206、CD163、Arginase I、CD209）的单标和双标免疫组化及定量相关分析。MGMT_p甲基化状态通过甲基化特异性定量PCR或EpiMelt MS-HRM检测。此外，利用公共单细胞RNA测序数据集（Darmanis等、Neftel等、Wang等）和TCGA-GBM bulk转录组数据，在转录水平分析C3AR1的表达分布及其与巨噬细胞转录程序的关系。统计学方法包括非参数检验、Spearman相关、Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险回归。

3.1 患者特征：共纳入114例IDHwt GBM患者，中位年龄62.4岁（范围33.9–81.7），男:女=1.59。63.2%的患者接受肿瘤切除术。81例有MGMT_p甲基化结果，其中31例甲基化、50例未甲基化。

3.2 C_3aR表达呈显著肿瘤间异质性：数字图像分析显示，C_3aR阳性细胞数中位数为25.5（范围0–3346），分布高度偏斜。按18个阳性细胞的切点，62例归为C_3aR高表达，52例为C_3aR低表达。活检与切除标本的瘤内异质性程度无显著差异（p=0.662）。

3.3 C_3aR与异质性巨噬细胞表型相关：双标免疫组化显示C_3aR与CD68、HLA-DR、CD206、CD163部分共表达。定量分析中，C_3aR阳性细胞数与CD68阳性细胞数强正相关（Spearman r=0.720，q<0.001），与HLA-DR中度正相关（r=0.449，q=0.027），与CD206呈名义显著相关（r=0.380，p=0.029），但多重检验校正后不显著（q=0.059），与CD163、Arginase I、CD209无显著相关。公共单细胞数据中，C3AR1在髓系/巨噬细胞区室中显著富集，且与微胶质细胞和TAM相关转录程序相关，未呈现一致的经典M1/M2极化模式。

3.4 C_3aR高表达组与MGMT_p甲基化相关：Kruskal-Wallis检验显示C_3aR表达在不同MGMT_p状态间存在差异（p=0.02），C_3aR高表达在MGMT_p甲基化肿瘤中富集（卡方检验p=0.004）。C_3aR表达与年龄、体能状态、性别、手术类型无显著相关。在TCGA-GBM中，C3AR1 mRNA水平与MGMT_p甲基化状态无显著关联（p=0.396）。

3.5 C_3aR表达与总生存期改善相关：在108例有体能状态资料的患者中，C_3aR高表达