《The Veterinary Journal》：Evaluating
ex vivo Toll-like receptor agonist response as a potential biomarker in equine gastric ulcer syndrome
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马胃溃疡综合征(EGUS)在马中高度流行。尽管其被认为具有疼痛性质，但与EGUS存在及严重程度相关的客观生物标志物评估仍有限。本研究旨在探讨外周血单个核细胞(PBMC)经离体Toll样受体2和4(TLR2和TLR4)刺激后释放白细胞介素-1β(IL-1β)作为
马胃溃疡综合征(EGUS)在马中高度流行。尽管其被认为具有疼痛性质，但与EGUS存在及严重程度相关的客观生物标志物评估仍有限。本研究旨在探讨外周血单个核细胞(PBMC)经离体Toll样受体2和4(TLR2和TLR4)刺激后释放白细胞介素-1β(IL-1β)作为EGUS状态潜在生物标志物的可能性，以胃损伤作为推测EGUS相关疼痛的替代指标。从77匹马采集静脉血，分离PBMC并以递增浓度的TLR2和TLR4激动剂(Pam3CSK4和脂多糖(LPS))刺激以评估IL-1β产生。Fisher精确检验比较有无EGUS马间IL-1β应答者比例。Cochrane-Armitage检验评估严重程度组间趋势，诊断潜力通过受试者工作特征(ROC)曲线分析评估。统计学显著性设为p<0.05。Pam3CSK4刺激TLR2在所有马中均未成功(均
研究背景与立项依据
马胃溃疡综合征(Equine Gastric Ulcer Syndrome, EGUS)在赛马中患病率高达80%–100%(鳞状型ESGD)和25%–65%(腺型EGGD)，但其疼痛程度与客观生物标志物长期缺乏。人类可用主诉评估疼痛，而马作为被捕食动物，面部表情量表(Horse Grimace Scale, HGS)和骑乘疼痛行为谱(RHpE)等非特异性行为指标受观察者与人在场影响，且急慢性炎症异质性大。前期在人骨关节炎、慢性腰痛及神经病理性疼痛中发现，离体刺激外周血单个核细胞(PBMC)的Toll样受体(TLR)2/4后白细胞介素-1β(IL-1β)释放增强可反映“疼痛致敏免疫表型”。研究人员假设EGUS伴随的慢性不适亦可 priming 循环免疫细胞，使TLR4刺激后IL-1β升高，从而成为客观生物标志物。论文发表于《The Veterinary Journal》。
主要技术方法概述
研究人员纳入77匹成年马(大学教学群+客户马)，排除14日内用药、全身炎症(SAA≥50 μg/mL)及中重度跛行者，最终分析64匹。胃镜按Sykes共识分ESGD/EGGD 0–4级；采静脉血离体分离PBMC，以TLR4激动剂大肠杆菌脂多糖(LPS, 0.01–100 ng/mL)及TLR2激动剂Pam3CSK4刺激18 h，ELISA测上清IL-1β(下限125 pg/mL)，以log10剂量-反应曲线下面积(AUC)定义LPS应答者(AUC>0)。统计用Fisher精确检验、Cochrane-Armitage趋势检验、ROC曲线及logistic回归敏感性分析。
研究结果
3.1 研究人群：77匹入组，剔1高SAA+12中重跛行，剩64匹；59/64(92.2%)有EGUS，其中ESGD单9、EGGD单4、混合46。
3.2 TLR2/Pam3CSK4：所有马各浓度IL-1β均< />
3.3 LPS-AUC与EGUS状态：无EGUS组应答2/5(40%) vs EGUS组14/59(24%)，OR=0.47(p=0.6)；ESGD阴性组应答5/9(56%)高于ESGD阳性11/55(20%，OR=0.21,p=0.04，与假设反向)；EGGD阴性2/14(14%) vs 阳性14/50(28%,p=0.5)；Cochrane-Armitage显示ESGD/EGGD最大分级与应答频率无趋势(p=0.7/0.07)。
3.4 与HGS关联：应答者HGS 3.5±1.8 vs 无应答3.0±1.8(p=0.3)，各组间无差。
3.5 诊断效用：ROC下面积EGUS 0.39(0.11–0.67)、ESGD 0.30(0.10–0.49)、EGGD 0.56(0.43–0.68)，均低于随机判别。
3.6 敏感性分析：换用客观跛行或仅排SAA后ESGD反向关联消失(p=0.2/0.06)；校正性别、年龄、体重、体况、SAA均无显著混杂；EGGD分级3+4合并仍无趋势(p=0.07)。
讨论浓缩
生物学上，EGUS炎症多局限胃黏膜(唾液ADA、IgA变化，但SAA不升)，未系统性priming PBMC；ESGD酸溅伤偏急性、EGGD防御障碍偏慢性低度，但本队列静息采血未捕获发作痛。方法学上，人源协议移植至马：TLR2/Pam3CSK4无响应，LPS应答率仅25%，IL-1β单因子且ELISA LLOQ 125 pg/mL偏高，对照组极少(无EGUS n=5)致检验效能不足。作者指出缺乏同期客观疼痛金标准参照限制了“疼痛生物标志物”判定。结论译文：综上所述，所测LPS诱导PBMC IL-1β释放方案与EGUS状态无关；该发现受限于小样本、病变类型与慢性度异质、可测应答率低及疼痛炎症同步评估不足；自人研究移植的刺激/检测协议可能不足以敏感刻画马先天免疫反应性。胃溃疡在马中仍极普遍，但对福利与运动表现的确切影响未明，需以马验证协议、扩大队列并同步测痛与炎症，方能判断离体免疫反应在EGUS或其他疑似疼痛病中的临床价值。
