《International Journal of Molecular Sciences》：AMPK Pathway Activation Markers in GBM: Expression Patterns and Clinical Associations in a Real-World Study
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磷酸化ACC（pACC）是LKB1/AMPK通路的下游效应分子，可能在胶质母细胞瘤（GBM）中维持肿瘤生物能量代谢并发挥促瘤作用。在随机REGOMA试验中，pACC表达与瑞戈非尼（regorafenib）治疗的GBM患者总生存（OS）改善相关，但其在大型队列中
磷酸化ACC（pACC）是LKB1/AMPK通路的下游效应分子，可能在胶质母细胞瘤（GBM）中维持肿瘤生物能量代谢并发挥促瘤作用。在随机REGOMA试验中，pACC表达与瑞戈非尼（regorafenib）治疗的GBM患者总生存（OS）改善相关，但其在大型队列中的有效性尚不清楚。本研究旨在真实世界GBM队列中表征pACC与磷酸化AMPK（pAMPK）的表达，并评估其在接受二线瑞戈非尼或福莫司汀/洛莫司汀治疗患者中的预后与预测价值。这项回顾性、多中心转化研究中，研究人员通过免疫组化在174例IDH野生型GBM患者（瑞戈非尼组n=84，福莫司汀/洛莫司汀组n=90）的FFPE肿瘤切片上检测pACC与pAMPK，采用经验证的抗pACC单克隆抗体染色并以数字病理量化。生存分析包括单变量与多变量Cox比例风险模型及交互作用检验。pACC与pAMPK分别在85.6%和95.4%的标本中表达，呈异质性空间分布。两标志物在单变量分析中均与OS无显著关联，多变量分析中也无独立预后价值。瑞戈非尼较烷化剂OS显著延长（10.4对6.3个月；p=0.0021）。但治疗×pACC交互作用检验无统计学意义（校正p=0.610），无正式证据显示pACC状态带来差异化治疗效应。尽管瑞戈非尼下pACC阳性者OS较长，但正式交互作用不显著。这些探索性发现表明pACC尚非既定预测性生物标志物，需前瞻性强效能验证。
研究背景与立项依据
胶质母细胞瘤（glioblastoma, GBM）是成人最常见恶性原发性脑肿瘤，IDH野生型亚型预后极差。瑞戈非尼（regorafenib）作为多激酶抑制剂在REGOMA随机Ⅱ期试验中较洛莫司汀改善复发IDH野生型GBM总生存（OS），成为可行二线方案。REGOMA转化研究提示AMPK通路下游磷酸化ACC（pACC, phosphorylated ACC at Ser79）阳性与瑞戈非尼疗效相关，但AMPK激活标志物在大型真实世界队列中的表达谱、预后及预测价值未明，且既往小队列结论待独立验证。为此，研究人员开展回顾性多中心真实世界转化研究，纳入174例复发IDH野生型GBM（瑞戈非尼84例、福莫司汀/洛莫司汀90例），系统评估pACC与pAMPK（phosphorylated AMPK at Thr172）表达特征及其与生存和药物应答的关系。论文发表于《International Journal of Molecular Sciences》。研究核心结论为：pACC与pAMPK在GBM中广泛但异质性表达，均非独立预后因子；瑞戈非尼较烷化剂延长OS，但治疗×pACC交互作用不显著，pACC尚不能确立为瑞戈非尼预测性生物标志物，需前瞻交互效能验证。
主要技术方法概括
研究人员构建回顾性多中心队列，样本来源于REGOMA-OSS观察性队列及额外机构复发GBM存档FFPE组织，剔除IDH突变/未知后得174例。免疫组化采用单克隆抗pACC（Ser79）与抗pAMPK（Thr172）抗体，优化孵育与数字病理阈值；以LN229细胞ACACA/ACACB沉默行抗体特异性验证。染色由单一实验室多批次完成，Aperio扫描结合Genie分类器与Cytoplasmic v2算法盲法量化2+/3+胞浆信号，5%截断定义阳性。生存分析以二线治疗起始算OS/PFS，用单/多变量Cox模型、中位截点敏感性分析、ECOG 0–1受限队列下MICE缺失填补与IPTW（Inverse Probability of Treatment Weighting）校正，并做治疗×标志物交互项检验。
研究结果
2.1 pACC IHC染色精细化：研究人员延长一抗孵育至1小时，比较单抗与多抗，WB证实单抗偏好识别ACACA编码ACC1；57例平行染色Spearmanρ=0.802，5%截点一致率89.5%（κ=0.75）；批间中等以上阳性CV<30%，近阈值区间变异大。后续全析用单抗。
2.2 患者特征：174例（瑞戈非尼84/对照90），两组基线相似；瑞戈非尼组ECOG 0–1占比更高（100%对85.9%，p<0.001），pACC中位26.2对46.5（p=0.009），pAMPK 53.0对71.2（p=0.004）。
2.3 标志物表达模式与相关：pACC/pAMPK阳性率85.6%/95.4%；空间分周坏死、周血管、弥漫同质及混合，瑞戈非尼组周血管38.2%、混合38.2%；pAMPK与pACC Spearmanρ=0.47（p<0.001），ACC与pACC弱相关ρ=0.31；蜡块年份无趋势影响（pACC p=0.438）。
2.4 预后与预测价值：瑞戈非尼中位OS 10.4月对6.3月（单变量HR=0.62,p=0.0023；多变量aHR=0.69,p=0.0344）；pACC>5% OS 8.3对≤5% 7.5月（aHR=1.02,p=0.9516）；pAMPK无预后意义；中位截点敏感性分析同否。ECOG 0–1受限IPTW-aHR=0.64(p=0.021)，多变量aHR=0.54(p=0.002)。PFS组间无差。治疗×pACC交互OS单变量p=0.694、多变量p=0.610；PFS交互不显著；pAMPK阴性对照零例致无法评估。
讨论浓缩
研究人员指出AMPK持续激活是GBM代谢重编程特征，周坏死表达契合葡萄糖缺乏下LKB1/AMPK释放促侵袭的“Go-or-Grow”假设，周血管/同质表达反映致癌应激依赖。真实世界pACC阴性比例因单抗高敏降至9–19%，削弱了REGOMA原交互信号；且pACC取首发手术存档组织，而复发时通路状态可能演化，削弱了与二线疗效耦合。AGILE试验未做生物标志物故未复现REGOMA阳性。作者强调亚组生存数值倾向不能替代正式交互检验，pACC仍属探索候选。
结论翻译
总体而言，本研究通过大型真实世界队列拓展了对GBM中AMPK信号的认识，证明pACC与pAMPK广泛但异质表达。两标志物在整体队列中均与OS无单变量显著关联；瑞戈非尼组中pACC阳性者结局较好，与REGOMA原观察一致，但治疗×pACC交互检验未达显著，故pACC目前不能视为已验证预测性生物标志物。上述发现支持在具备充分统计效能以正式检验治疗效应修饰的前瞻研究中进一步评估pACC与pAMPK，方可考虑任何基于生物标志物的患者筛选策略。
