I 类衣壳装配调节剂通过直接抑制病毒、激活先天免疫以及不依赖 Caspase-3 的受感染肝细胞清除，诱导强效的抗 HBV 活性

《Antiviral Research》：Class I capsid assembly modulators induce potent anti-HBV activity through direct viral suppression, innate immune activation and caspase-3-independent clearance of infected hepatocytes

　　

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  CAM-A (GLS4) 迅速抑制 HBV DNA，伴随 HBsAg 下降延迟和 ALT 激增
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  CAM-A 在 HBV 模型中上调 ISGs 并激活 IFN-α/γ通路
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  CAM-A 诱导 HBcAg+ 肝细胞发生 TUNEL+ 且 caspase-3 非依赖性死亡
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  CAM-A 效应无需适应性免疫即可持续；与天然免疫调节剂（如 TLR7 激动剂）协同作用

引言

慢性 HBV 感染仍然是全球主要的健康危机，全球受影响人数超过 2.54 亿，是肝硬化和肝细胞癌 (HCC) 的主要原因 1, 2, 3。目前的常规治疗包括核苷 (酸) 类似物 (NAs) 和聚乙二醇干扰素 -α (Peg-IFN-α)。虽然 NAs 能强效抑制 HBV DNA 复制，但很少实现乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 丢失或功能性治愈——定义为 HBsAg 血清清除持续存在，伴或不伴血清转换 4, 5。Peg-IFN-α 导致的功能性治愈率较低，且往往耐受性较差⁶。治愈的主要障碍是共价闭合环状 DNA (cccDNA) 和整合的 HBV DNA (intDNA) 在感染肝细胞核内的长期持续存在，这作为病毒抗原和复制的稳定转录模板 7, 8, 9。因此，当代 HBV 药物开发的最终目标是消除 cccDNA 和 intDNA，通过非细胞溶解或细胞溶解途径，后者策略对于实现灭菌性清除更为有效¹⁰。

HBV 核心蛋白 (HBc) 是病毒生命周期中必不可少的多功能成分，参与核衣壳组装、逆转录和 cccDNA 的维持 11, 12, 13。因此，HBc 已成为新型直接抗病毒药 (DAAs) 的吸引力靶点 14, 15。CAMs 是与 HBc 结合并破坏衣壳形成的小分子化合物 16, 17。根据机制分为两大类：I 类 CAMs (CAM-A)，如 GLS4，诱导异常的、易于聚集的核心蛋白聚合物；II 类 CAMs (CAM-E)，加速空衣壳的快速组装 15, 18, 19, 20。临床前研究揭示了这些类别之间的关键差异 21, 22, 23。虽然两者都表现出强效的 体外 抗病毒活性，但只有 CAM-A 在 HBV 感染动物模型中持续诱导血清 HBsAg 显著、延迟的减少 24, 25, 26。此外，GLS4 的临床试验也展示了与治疗性丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 激增相关的伴随 HBsAg 快速减少，特别是对于 HBeAg 阳性感染者²⁷。在接受 RG7907 治疗的部分患者中也观察到 ALT 轻度升高；然而，ALT 激活在 CAM-E 治疗的患者中并不常见 28, 29, 30，例如 JNJ-637931, 32 和 ALG-000184³³。这种独特的特征表明 CAM-A 的作用超出了单纯的复制阻断，可能涉及促进宿主介导的感染细胞清除和/或调节免疫微环境，这对于 HBsAg 丢失至关重要 34, 35, 36, 37, 38。然而，CAM-A 介导清除的精确分子和细胞机制，包括涉及的具体细胞死亡途径，仍知之甚少¹⁴。

在本研究中，我们探索了 CAM-A 的多方面机制，包括天然免疫激活和感染肝细胞的清除，为慢性 HBV 感染的潜在联合策略提供了新的见解。本工作的范围仅限于机制研究，而个别化合物的全面药代动力学、代谢和毒理学特征要么已在此前报道，要么存在于相应的监管文件中，这里不再重复。

章节摘要

化合物

本研究中使用的所有测试药物（包括 GLS4 和其他 CAM-A 化合物）、试剂和缓冲液，以及药物配方和给药方案，均由阳光湖药业股份有限公司提供。JNJ-632 (CAS 1572510-42-9) 购自阿拉丁生化科技。HEC121120 和 HEC160208 是 GLS4 的优化 I 类 CAM 类似物，共享 GLS4 药效团支架；两者均已在中国进入临床开发阶段，登记号分别为 CTR20201605 和 CTR20212114，

CAM-A 在体外激活天然免疫

我们首先评估了两种 CAM-A 化合物 GLS4 和 HEC160208（基于 GLS4 的优化化合物）在 HepAD38 细胞系中的潜在免疫调节作用 in vitro。通过撤除 TET 72 h 诱导 HBV 复制，随后用 GLS4 或 HEC160208 处理（图 1A）。GLS4 和 HEC160208 均诱导了干扰素刺激基因 (ISGs) IP-10、MX1 和 OAS1（图 1B-D）。对于经典抗病毒效应物 MX1 和 OAS1，两种化合物的诱导均随浓度升高而增加

讨论

CAM-A，如 GLS4 和 HEC160208，通过多种机制表现出强效的抗 HBV 活性，包括直接干扰核衣壳组装、激活天然免疫反应以及清除感染肝细胞。我们的研究结果表明，CAM-A 治疗迅速抑制血清 HBV DNA，随后 HBsAg 和 HBeAg 延迟减少，伴随 AAV-HBV 小鼠模型中转瞬时的 ALT 升高。这些效应与 ISGs 的上调和

作者贡献声明

王普：写作 - 审查与编辑，监督，资源。顾宝华：写作 - 审查与编辑，监督，资源。李静：写作 - 审查与编辑，监督，资源。谢勇：形式分析。张英军：监督，资源。王普：写作 - 审查与编辑，写作 - 初稿，可视化，验证，项目管理，方法论，调查，形式分析，数据整理，概念化。刘新昌：形式分析

伦理声明

本研究符合 ARRIVE（动物研究：体内实验报告）指南。本研究已获 IACUC 批准。（批准号 ID01-013-2020v1.0;VST-SY-20201007;VST-SY-20211020）

数据可用性

支持本研究结果的所有其他数据均可在文章及其补充材料中找到，或应合理要求向通讯作者获取。特定化合物的特征和监管数据为阳光湖药业专有，可在材料转移或保密协议下提供。

竞争利益声明

作者是阳光湖药业股份有限公司的员工，该公司开发本研究中所描述的化合物。

手稿准备过程中生成式 AI 和 AI 辅助技术的声明

作者声明在准备本手稿过程中未使用生成式 AI 或 AI 辅助技术。

资助

本工作得到了 抗感染药物研发国家重点实验室 (Grant No. 2015DQ780357) 和 广东省抗病毒药物研发企业重点实验室 (Grant No. 2023B1212070004) 的资助。

竞争利益声明

? 作者声明他们没有已知的竞争经济利益或个人关系可能影响了本论文中报告的工作。

王普|刘新昌|谢勇|张英军|顾宝华|李静|陈云飞