《Genes》：Mutational Landscape of Primary Hyperoxaluria in Morocco: Update and Implications for Diagnosis
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原发性高草酸尿症（Primary Hyperoxaluria, PH）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，以草酸盐过量蓄积为特征，导致肾结石病（nephrolithiasis）、肾钙质沉着症（nephrocalcinosis），并最终引起肾功能衰竭和系统性草酸盐沉
原发性高草酸尿症（Primary Hyperoxaluria, PH）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，以草酸盐过量蓄积为特征，导致肾结石病（nephrolithiasis）、肾钙质沉着症（nephrocalcinosis），并最终引起肾功能衰竭和系统性草酸盐沉着症（systemic oxalosis）。PH有3种类型，即1型、2型和3型，分别由AGXT、GRHPR和HOGA1基因变异引起。在近亲婚配常见的摩洛哥，已有主要影响AGXT基因的复发性变异的报道；然而，PH的整体分子特征仍知之甚少。研究人员旨在描述摩洛哥PH的突变谱，并提供一种准确的诊断策略。方法：研究人员采用阶梯式策略分析了10年内转诊的132例PH疑似患者。第一步检测包括对AGXT基因第7外显子进行Sanger测序，随后对AGXT基因第1、2和10外显子进行测序。第二步分析由针对三个PH相关基因的定制基因面板组成。未确诊病例作为第三步接受全外显子组测序（whole-exome sequencing, WES）。结果：一线Sanger测序在132例疑似PH患者中的95例中鉴定出双等位基因致病性或可能致病性AGXT变异，诊断率为72%。通过靶向PH基因面板测序和WES获得的额外分子诊断将最终累积诊断率提高至78%。通过Sanger测序表征了12种不同变异，其中AGXT基因第7外显子的c.731T>C成为最常见的变异，支持其在该人群中的奠基者效应（founder effect）。其他变异主要位于第7、10、2和1外显子，突出了该人群中的突变热点。在未确诊病例中，二代测序（next-generation sequencing, NGS），包括靶向基因面板和外显子组测序，发现了AGXT基因中额外的致病变异以及与PH样表型相关的其他基因变异。结论：这些结果强调了在资源有限的环境（如摩洛哥）中采用简化、聚焦外显子的诊断策略的必要性。
原发性高草酸尿症（Primary Hyperoxaluria, PH）是一组常染色体隐性遗传病，因肝脏乙醛酸代谢异常导致草酸盐产生过多，临床上表现为肾结石、肾钙质沉着，并可进展至肾衰竭及系统性草酸盐沉着症。PH分为三型，分别由AGXT、GRHPR和HOGA1基因变异引起。在摩洛哥，近亲婚配率高，PH1相对常见，估计患病率在1/7267至1/6264之间。尽管已有研究报道了AGXT基因的复发性变异，但该国PH的整体突变谱仍不明确。传统诊断依赖肝活检酶活性测定，而分子检测因无创、简便正日益受到重视。由于三型PH临床表现高度重叠，且摩洛哥无法检测尿乙二醇酸，临床分型十分困难。为此，研究人员对132例来自摩洛哥不同地区、10年内转诊的PH疑似患者进行了大规模分子研究，旨在描述该人群的突变谱并建立适合当地条件的诊断策略。该研究通过阶梯式分子诊断流程，发现一线Sanger测序诊断率为72%，结合靶向基因面板和全外显子组测序（whole-exome sequencing, WES）后最终诊断率提升至78%。最常见变异为AGXT基因的c.731T>C（p.Ile244Thr），呈纯合状态，提示其在该人群中的奠基者效应；研究还发现了其他突变热点及一个新型致病变异。这些发现为摩洛哥等资源有限地区提供了简化、聚焦外显子的分子诊断路径，有助于早期诊断和精准治疗。该论文发表在《Genes》。
在技术方法上，研究人员从132例摩洛哥疑似PH患者外周血中提取基因组DNA。首先采用Sanger测序检测AGXT基因第7外显子，阴性者再测第1、2、10外显子；第二步对未确诊或仅携带单个杂合变异的患者，使用定制靶向基因面板（Ion AmpliSeq）筛查AGXT、GRHPR和HOGA1基因的外显子及侧翼序列；第三步对未解决病例进行WES。测序数据经生物信息学分析，变异按照美国医学遗传学与基因组学学会（ACMG）指南分类。样本队列为摩洛哥全国多地转诊的132例患者。
研究结果方面，在4.1 Recurrent Molecular Findings in Sanger Sequencing Results（Sanger测序结果的复发性分子发现）中，通过一线Sanger测序，95例患者被鉴定出AGXT双等位基因致病或可能致病变异，诊断率为72%。共表征12种不同变异，其中c.731T>C最为常见，占126/264个等位基因，59例为纯合。其他变异主要位于第7、10、2、1外显子，表明这些区域存在突变热点。此外还发现一个新型变异c.346G>C（p.Gly116Arg），依据ACMG标准被归为致病性。
在4.2 Molecular Findings in Targeted Panel Results（靶向基因面板的分子发现）中，对37例Sanger阴性患者进行靶向面板测序，额外在2例患者中检测到AGXT基因的纯合变异c.603C>A（第6外显子）和c.919del（第9外显子）；另有3例患者检出意义未明变异（variant of uncertain significance, VUS），但均未发现反式第二变异。该面板总体诊断贡献有限。
在4.3 Other Genetic Findings and Diagnostic Reassessment（其他遗传发现与诊断再评估）中，对35例未解决病例进行WES，在6例患者中发现SI、SLC5A1、CLCN5、ATP6V0A4和SLC4A1等基因的变异。这些基因涉及肾小管疾病或肠吸收不良，可表现肾结石、肾钙质沉着等PH样表型。例如，CLCN5变异提示Dent病，ATP6V0A4和SLC4A1变异与远端肾小管酸中毒相关，SI和SLC5A1变异分别与先天性蔗糖酶-异麦芽糖酶缺乏症及葡萄糖-半乳糖吸收不良相关。这些结果说明，部分疑似PH患者实际上患有其他遗传病，分子检测有助于重新评估诊断。
讨论部分指出，该研究是摩洛哥最大规模的PH分子研究，高频率的c.731T>C变异与北非和西班牙人群一致，支持其在地中海地区的奠基者效应。研究中存在缺乏生化确认等局限性，未解决病例提示可能存在尚未明确的乙醛酸代谢基因缺陷，PH实际患病率可能更高。整合NGS有助于识别替代性遗传病因，减少诊断不确定性。
研究结论部分可翻译为：总之，本研究提供了摩洛哥疑似PH患者最大规模的分子特征描述，并强调AGXT：c.731T>C变异是摩洛哥人群中的复发性突变。基因检测在PH中具有重要的治疗意义，因为它可以识别可能受益于吡哆醇治疗的患者，并支持获得RNA干扰药物等靶向治疗。因此，分子诊断不仅对于确诊PH至关重要，而且对于指导个体化治疗、预后评估和长期临床管理也必不可少。最后，本文描述的阶梯式工作流程可在摩洛哥背景下实现可靠的PH分子诊断，即使没有事先的临床分型，也能支持对受累患者进行早期准确诊断。
