四价登革热灭活疫苗与减毒活疫苗序贯初免-加强策略在随机开放标签I期研究中的评估：对理解保护性免疫相关因素的意义

《mSphere》：Evaluation of inactivated and live attenuated, tetravalent dengue vaccine prime-boost strategies in a randomized, open-label, phase I study: implications for understanding immune correlates of protection

　　

需要能诱导针对全部四种登革病毒(DENV)类型的平衡保护性免疫的疫苗，以降低全球登革疾病负担。实现该目标对登革疫苗研发者而言一直存在挑战，尤其在免疫学初始(na?ve)个体中免疫时。在一项40名健康成人的随机、I期、开放标签研究中，研究人员评估了异源四价纯化灭活疫苗(PIV)初免与四价减毒活疫苗(LAV)加强方案，比较0、90天与0、180天两种PIV/LAV序贯间隔。两种方案均诱导出相似、高水平且平衡的细胞与体液免疫应答，但压缩间隔伴随更重不良事件。在后续临床试验中，PIV/LAV接种者经DENV-1攻击后多数未受保护，且较未接种对照组出现更明显类登革热症状。这些结果凸显了在登革疫苗介导保护与疾病风险的机制性相关因素理解上的关键缺口。已知的保护相关因素包括急性期样本中通过定量RT-PCR检测特定DENV型别病毒基因组暴露证据，或暴露后型特异性抗体应答（如血清抗体耗竭法测量）。然而，当前型特异性抗体测量方法并不理想，即便在较小临床试验中也难以评估接种者群体。亟需新型高通量方法确定DENV型特异性免疫应答并发现其他保护相关因素，以更可靠评价登革疫苗候选物。

研究背景与立项依据

登革病毒(DENV)1–4型在全球热带亚热带超百国流行，年感染约3.9亿，是旅行者最常见的虫媒病毒病，目前无特效抗病毒治疗，临床仅支持疗护。疫苗研发核心难点在于须同时诱导四型平衡保护以规避二次感染所致重症风险，且保护性免疫相关因素与免疫介导重症风险长期未明。已上市Dengvaxia(CYD-TDV)不适用于血清阴性者并于2024年停产，Qdenga(TAK-003)与NIH TV003处于上市后或III期随访。美国陆军WRAIR早年构建四价减毒活疫苗(LAV)，但单用LAV中和抗体(NAb)对四型不平衡；四价纯化灭活疫苗(PIV)初免可平衡但滴度不持久。前期证实PIV初免+LAV加强优于0、28天方案，0、180天更优。本研究即在I期框架内插入中间间隔0、90天组，与0、180天组对照，进一步优化剂次间隔并衔接后续DENV-1人体攻击试验。论文发表于《mSphere》。

主要关键技术方法

研究为I期随机开放标签试验，在WRAIR临床中心(NCT02239614)纳入40名18–42岁DENV血清阴性健康成人，1:1分两组：G1于0天肌注PIV、180天皮下注LAV；G2于0天肌注PIV、90天皮下注LAV。安全性靠28天内主动征集局部/全身不良事件(AE)及严重AE记录；LAV病毒RNA血症用定量RT-PCR在接种后6–16天连采血清判定；体液免疫用微中和试验(MN50)测DENV1–4中和抗体；细胞免疫用干扰素γ酶联免疫斑点(IFN-γ ELISpot)以全长度E/NS1/NS3/NS5及CM重叠肽池刺激外周血单个核细胞(PBMC)于0、28、180天检测；统计用GraphPad Prism行Friedman/Kruskal–Wallis检验。部分受试者(5人)横接后续DENV-1人类感染模型试验。

研究结果

研究设计：40人随机分两组，最终免疫原性队列G1为14人、G2为17人，基线均衡。

安全性与反应原性：PIV后注射痛52.5%，LAV后G1/G2全身症状常见；G2(0、90天)出现红斑31.6%、关节痛31.6%及严重疲劳/头痛/肌痛/恶心/呕吐各约5–10%，重反应仅见于G2，非因RNA血症差异。

LAV病毒RNA血症：两组建模相似，DENV-2阳性率>50%，DENV-1/4低，DENV-3为零；PIV初免者RNA血症频率显著高于历史LAV单独组但峰值相当，提示抗体依赖增强(ADE)可能提高检出率。

体液免疫：PIV后NAb低；LAV加强后28天G1四型100%阳转、G2 94%阳转，中位MN50两组成衡(型间差≤4倍)，G2略高；1年后衰减5–14倍，半衰期98–189天；2.5年随访亚组DENV1–3稳定、DENV4部分衰减7倍。

细胞免疫：LAV后180天IFN-γ ELISpot较基线升9–102倍，DENV-2偏强；G2中位高于G1但无统计显著；蛋白定位以NS3、E为主；与LAV单独组差<4倍，示PIV初免对T细胞幅度无增益；2.5年亚组IFN-γ多衰减>4倍。

讨论与结论翻译

登革疫苗研发在免疫初始个体中尤难，因接种可模拟初次暴露并在自然感染时增重症风险，且保护相关因素不明。本研究评估0、90天与0、180天PIV/LAV序贯，两方案诱相似高效平衡体液/细胞应答，但90天组AE更重。后续DENV-1攻击中，本试验5名接种者6个月免疫应答良好、2.5年仍可检，却4/5未保护且发热样症状早于对照组、更重；唯一保护者预存免疫无异于他人，无法归因。未见DENV-1 LAV RNA血症提示该型生产性感染弱，或致低质交叉免疫。研究局限为样本小、退出与采样窗限制。总体PIV/LAV序贯诱出预期可保护之免疫，但攻击失效且症状加重，明确证明登革保护与风险相关因素仍缺；需以高通量型特异性免疫评测替代传统血清耗竭法，方能可靠推进候选疫苗评价。