核酸提取使用的是QIAamp DNA Mini Kit(QIAGEN)。用于测序的核酸浓度为1 ng/μL(Thermo Fisher Scientific公司的Qubit荧光计测定)。借助Nextera XT DNA Library Prep Kit(Illumina公司)构建了双端文库(2 × 10^1),并在HiSeq 2500测序系统(Illumina公司)上进行测序。测序产生了11,607,371条reads,通过Trimmomatic软件v0.39(
7)进行处理,并使用Megahit软件v1.2.9(
8)通过
de novo策略进行组装,产生了29,790个contigs,长度范围为201至385,747 bp。这些contigs使用Kraken2 v2.1.0(
9)进行了分类注释,其中一条9,680 bp的contig被鉴定为
Megrivirus aturhepa A2的成员,与参考菌株LY(
KC663628)的核苷酸同源性为61.8%。该基因组的覆盖率为约115.0×,形成了近乎完整的基因组序列。基因组比对和整理使用的是Geneious Prime v2025.2.1(
10)。基因组注释和手动整理参考了从ICTV和GenBank检索的18个
Megrivirus基因组(
KY369299KY369300KC663628MT138381MH453806MH453805MF405436KC876003KC811837KY488458HM751199HQ189775KF979336KF979335KF961188KJ690629KF961186KF961187)。所得到的
Megrivirus aturhepa JF05/BA/BRA菌株的基因组为线性结构,长度为9,594 bp,GC含量为47.0%,编码一种多聚蛋白。相同的18个基因组还被用于使用FastTree软件v2.1.11(
11)进行的系统发育分析。除非另有说明,所有生物信息学工具均使用默认参数运行。与ICTV和GenBank中的所有
Megrivirus参考基因组相比,P1、P2和P3多聚蛋白区域的核苷酸同源性最高,分别为63.7%、61.6%和66.1%(所有值均对应
Megrivirus aturhepa物种)。系统发育分析显示所有物种形成了支持度较高的群体,bootstrap值均超过91%。JF05菌株是
Megrivirus aturhepa物种的独立群(
图1)。结果表明,JF05菌株可能是
Megrivirus aturhepa的一个分化菌株,也可能代表一个新物种,这强调了监测家禽和野生鸟类中的picornaviruses的重要性,以便发现可能对农业造成问题并对人类健康产生影响的新型病原体。