扩增 NK 细胞及抗自毁 CD70 CAR-NK 细胞在体外和体内对患者来源的胶质母细胞瘤细胞具有强效

《Cancer Immunology, Immunotherapy》：Expanded NK and fratricide-resistant CD70 CAR-NK cells are potent against patient-derived glioblastoma cells in vitro and in vivo

　　

摘要

多形性胶质母细胞瘤（GBM）是一种高度恶性的脑肿瘤，其特征是肿瘤广泛复发且患者生存率极低。虽然基于αβ T 细胞的嵌合抗原受体（CAR）免疫疗法在血液恶性肿瘤中显示出疗效，但制造延迟和潜在的致命性免疫过度激活促使人们探索替代细胞来源，包括自然杀伤（NK）细胞。由于 NK 细胞具有强大的非抗原依赖性内在细胞毒性、自我调节抑制机制以及较低的移植物抗宿主病风险，因此代表了一种新兴的细胞来源。在本研究中，我们使用表达膜结合 IL-21 的 K562 饲养层细胞（K562-mb-IL-21）扩增外周血 NK 细胞，以产生针对细胞系和患者来源的 GBM 肿瘤细胞的高活化且代谢稳健的细胞。此外，我们的体外结果证明了我们扩增的 NK 细胞具有广泛的靶向潜力，因为它们对另一种恶性脑肿瘤——髓母细胞瘤（MB）的细胞系和患者来源样本表现出细胞毒性。为了增强肿瘤定向细胞毒性，我们利用 CRISPR/Cas9 和基于腺相关病毒的基因递送系统生成了稳定的抗 CD70 CAR-NK 细胞。由于 CD70 在健康组织中表达极少且在复发性 GBM 中过表达，因此是一个有前景的靶点。然而，NK 细胞在扩增后会获得 CD70 表面表达，导致抗 CD70 CAR-NK 细胞自相残杀。随后，敲除 CD70 基因使得抗 CD70 CAR-NK 细胞得以大规模扩增，这些细胞在体外和体内 GBM 模型中均具有功能性。