《Foods》：Reliable Analytical Approach for the Quantification of the Cholesterol Adsorption Capacity of Artichoke Leaves
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可靠测定胆固醇吸附能力（CAC）对于评价膳食纤维的降胆固醇潜力至关重要，然而现有分析程序缺乏方法学标准化，且常依赖易受基质干扰的分光光度法。本研究旨在建立并验证一种简便可靠的流程，用于评估分级洋蓟叶的CAC。研究人员在模拟胃肠条件下进行体外实验，残留胆固醇采用
可靠测定胆固醇吸附能力（CAC）对于评价膳食纤维的降胆固醇潜力至关重要，然而现有分析程序缺乏方法学标准化，且常依赖易受基质干扰的分光光度法。本研究旨在建立并验证一种简便可靠的流程，用于评估分级洋蓟叶的CAC。研究人员在模拟胃肠条件下进行体外实验，残留胆固醇采用高效液相色谱（HPLC）结合两种检测系统（紫外-可见分光检测器与光散射检测器（LSD））定量。该色谱方法在线性、灵敏度、精密度与准确度方面均通过验证，并与常规正交邻苯二甲醛（OPA）分光光度法比较。先测试若干纯商业纤维，果胶与木质素显示最高CAC；所有供试叶片组分均表现CAC，外叶组分显著高于内生木质化组分。所提工作流为CAC测定提供了可靠一致的分析框架，并揭示洋蓟叶膳食纤维潜在降脂特性，支持其作为功能配料进一步研究。
研究背景与立项依据
心血管疾病（CVD）是全球首要死因，高胆固醇血症尤其是低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）升高是主要可调风险因子。他汀类药物虽有效但伴副作用，植物膳食纤维通过直接结合胆固醇与胆汁酸、提高肠黏度、促进粪甾醇排泄及微生物发酵产短链脂肪酸抑制肝胆固醇合成等机制发挥降脂作用。然而当前CAC测定方法学未统一，常规正交邻苯二甲醛（OPA）分光光度法易受基质中共提色素与次生代谢物干扰；色谱法虽选择性高，但前处理（脂质提取与皂化）依赖性强，且文献中吸附条件（仅pH 2.0/7.0振荡 vs 全胃肠模拟）不统一。洋蓟叶作为农业副产品此前少被视作木质纤维素纤维源，其叶部CAC系统评价缺失。为此研究人员以洋蓟叶为案例，建立一套可推广至其他植物基质的可靠CAC分析框架，论文发表于《Foods》。
主要关键技术方法
研究人员采用INFOGEST 2019静态体外消化模型（口-胃-肠三阶段，以新鲜蛋黄为胆固醇载体，0.5 g样品/管，三复孔），消化后离心取上清，经乙醇-KOH皂化、正己烷萃取、氮吹复溶进样；色谱系统为Shimadzu HPLC串联UV-Vis（210 nm）与Sedex 55 LSD，Robusta 100A C18柱，乙腈/异丙醇（70:30 v/v）流动相，30 °C，20 μL进样，LSD漂移管80 °C、氮压240 kPa；方法学按ICH Q2(R2)验证线性（UV低1.75–73 μg/mL、高146–750 μg/mL；LSD低3.5–146 μg/mL、高146–750 μg/mL）、LOD/LOQ（空白10针统计）、日内/日间精密度与加标回收；并行以改良Rudel-Morris OPA法（550 nm）比色对照。植物材料为2024年5月意大利佩鲁贾近郊“Romanesco”洋蓟叶，分外叶（A>1.18 mm、B<1.18 mm）与内叶（C<1.18 mm、D>1.18 mm）四组分，另购纤维素微晶、纤维态纤维素、菊糖、碱木质素、苹果果胶作标准纤维。
研究结果
3.1 体外胆固醇吸附测试条件建立
研究人员将INFOGEST全消化序列引入CAC评价，以蛋黄模拟食物基质，消化后皂化-正己烷萃取除蛋白磷脂干扰，确立RP-C18/乙腈-异丙醇体系与UV+LSD双检测串联，指出低紫外波长下UV易受共洗脱物影响而LSD可提高复杂基质选择性。
3.2 胆固醇HPLC分析方法验证
两系统线性R2≥0.9853，LOD/LOQ满足痕量定量；日内RSD UV 1.25–6.34%、LSD 0.42–6.44%，日间RSD UV 2.26–4.69%、LSD 1.17–6.71%；回收率100.11–118.42%（日内）与102.59–114.44%（日间），低浓度UV偏差略大；OPA标准曲线R2=0.9992。方法符合ICH Q2(R2)。
3.3 纯商业纤维CAC结果
HPLC双检测器间无显著差异（p>0.05）；果胶CAC最高（>80%吸附率），次为木质素，菊糖最低，纤维素约5–10 mg/g。OPA/UV对木质素、果胶给出更高值（p<0.05），微晶纤维素HPLC反高于OPA，印证OPA在含芳环/色素基质中易高估。
3.4 洋蓟叶组分CAC结果
四组分均有CAC，外叶A、B显著高于内叶C、D（p<0.05）；HPLC-UV与HPLC-LSD同组分无差异，OPA/UV普遍偏高且与HPLC差显著，归因于叶绿素、类胡萝卜素、酚类在200–800 nm共吸收。A、B组分（约9–20 mg/g by HPLC）可比苹果皮、豆壳、茶籽、灵芝膳食纤维。文献对比显示多数旧研究未模拟全消化且只用OPA，本工作数值处于植物纤维中上区间。
讨论与结论翻译
讨论指出蛋黄基质本身可能带来非纤维吸附损失，未做基质匹配回收故CAC降低不能完全归功纤维；未来需动态消化与体内试验验证。结论部分：本研究提出结合INFOGEST静态消化与HPLC-UV/LSD验证定量的可靠CAC流程，两色谱法线性、精密度、准确度、灵敏度达标，较OPA分光光度法选择性更优、抗干扰更强；商业纤维中果胶与木质素CAC最高；洋蓟叶各组分皆具吸附力，外叶胜于内叶；洋蓟叶作为丰富农副产物有望作降脂功能配料。该框架提升CAC研究可比性，并为洋蓟叶健康潜力提供新证，后续应联结构效与生理相关动态/体内模型。
