《International Journal of Molecular Sciences》：Integrated Network and Transcriptomic Analyses Identify a Candidate Ethanol–ADAM17 Molecular Axis Associated with Glioblastoma Progression
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肺癌具有较高的死亡负担，其中转移播散是预后不良的主要原因。骨唾液酸蛋白（Bone sialoprotein, BSP）属于SIBLING家族的基质细胞蛋白，已被认为与肿瘤侵袭有关，但其在肺癌中的作用尚未充分阐明。临床数据库分析表明，BSP是与肺癌增殖和转移最相
肺癌具有较高的死亡负担，其中转移播散是预后不良的主要原因。骨唾液酸蛋白（Bone sialoprotein, BSP）属于SIBLING家族的基质细胞蛋白，已被认为与肿瘤侵袭有关，但其在肺癌中的作用尚未充分阐明。临床数据库分析表明，BSP是与肺癌增殖和转移最相关的SIBLING蛋白。研究人员临床数据亦证实，转移性肺癌中BSP水平高于非转移病例。研究人员进一步证明，BSP通过上调ADAM9（A disintegrin and metalloproteinase 9）表达促进肺癌进展与运动能力。机制上，研究人员揭示BSP经FAK（focal adhesion kinase）通路增强ADAM9依赖的增殖与运动。此外，hsa_circ_0084050/miR-373-3p调控轴参与BSP介导的ADAM9调节。在经尾动脉注射A549对照或稳定BSP-shRNA细胞于雄性BALB/c裸鼠建立的探索性小鼠转移模型中，BSP敲低与转移瘤负荷降低相关。因此，BSP可作为限制肺癌进展与转移播散的治疗靶点。
研究背景与立题依据：肺癌是全球癌症死亡的首要原因，高致死率主要源于其强转移潜能与晚期确诊。转移涉及肿瘤细胞存活、迁移及远处定植的复杂分子网络，现有分子与免疫治疗在晚期疗效有限。ADAM9作为去整合素金属蛋白酶家族成员，在多种恶性肿瘤（含肺癌）中促进侵袭、增殖与迁移，其沉默可抑制非小细胞肺癌（NSCLC）进展，是潜在治疗靶点。非编码RNA（circRNA、miRNA）在转录及转录后水平调控基因表达，circRNA常作为miRNA海绵间接调控癌基因。BSP属SIBLING（small integrin-binding ligand N-linked glycoprotein）家族基质细胞蛋白，在骨转移中富集，与NSCLC转移及不良预后相关，但其上游调控ADAM9的具体机制未明。为此，研究人员开展本研究，旨在阐明BSP经何种信号与RNA调控轴驱动ADAM9表达并促进肺癌转移。
主要关键技术方法：研究整合GEPIA2、TNMplot、TCGA-LUAD及TIMER2.0等公共数据库进行生存、分期与相关性分析；采用人NSCLC细胞系A549与CL1-5及既往建立的稳定A549 BSP-shRNA克隆进行体外功能实验；临床样本来自中国医药大学医院6例肺癌患者（3例非转移、3例转移）石蜡标本用于免疫组化（IHC）验证；体内实验采用6周龄雄性BALB/c裸鼠经尾动脉注射1×106 A549或A549 BSP-shRNA细胞（每组n=3），8周后活体生物发光成像及离体肺与后肢H&E、IHC评估转移负荷；分子实验涵盖Western blot、RT-qPCR、集落形成、伤口愈合、siRNA敲低、miR-373-3p模拟物过表达、荧光素酶报告基因及FAK抑制剂narmafotinib药理阻断。
研究结果：
2.1 升高BSP表达与肺癌进展及转移相关：数据库与临床标本均显示BSP在肺癌组织尤其是转移灶中高表达，且随病理分期上升；外源BSP呈浓度依赖性增强A549与CL1-5细胞活力、集落形成与迁移。
2.2 BSP刺激ADAM9依赖性肺癌细胞增殖与运动：TCGA与TIMER2.0显示BSP与ADAM9表达正相关最强；BSP处理上调两株细胞ADAM9蛋白/mRNA，ADAM9 siRNA可逆转BSP促增殖迁移效应，确立ADAM9中介地位。
2.3 BSP经激活FAK通路增强ADAM9依赖性增殖与运动：通路富集指向黏着斑/FAK；BSP刺激10分钟内诱导FAK（Tyr397）磷酸化；FAK抑制剂narmafotinib或FAK siRNA均抑制BSP诱导的ADAM9上调及细胞功能增强。
2.4 miR-373-3p调控BSP诱导的ADAM9表达及细胞增殖运动：生信预测miR-373-3p靶向ADAM9 3′-UTR；BSP下调miR-373-3p，其模拟物过表达抑制BSP促ADAM9及促迁移集落形成；荧光素酶实验证实miR-373-3p直接结合ADAM9 3′-UTR。
2.5 BSP经hsa_circ_0084050吸附miR-373-3p调控ADAM9：starBase预测hsa_circ_0084050结合miR-373-3p；沉默hsa_circ_0084050逆转BSP促ADAM9及促功能表型；荧光素酶报告证实二者序列依赖互作，形成BSP→hsa_circ_0084050↑→miR-373-3p↓→ADAM9↑轴。
2.6 BSP敲低抑制小鼠模型肺癌进展与播散：A549 BSP-shRNA体外ADAM9低表达且功能减弱；体内尾动脉模型8周时活体信号、肺与后肢转移结节、肿瘤面积及ADAM9 IHC均低于对照，印证BSP促转移。
讨论部分总结：研究人员讨论指出，BSP经FAK激活与hsa_circ_0084050/miR-373-3p轴上调ADAM9，构成此前未识别的转移调控环路；本文局限包括临床样本仅6例单视野、动物仅雄性且n=3、未做ADAM9 Rescue实验、circRNA环状结构未在A549/CL1-5中经RNase R等验证、内源吸附未用RNA pull-down/AGO2-RIP确证，故结论属探索性，需大队列与双性别扩充验证。BSP可作为肺癌转移候选靶点，但距临床转化尚需药效与安全性研究。
结论部分翻译：本研究确定BSP为肺癌中ADAM9的上游调节因子。BSP激活FAK信号并调节hsa_circ_0084050/miR-373-3p轴，从而升高ADAM9表达，促进癌细胞增殖、迁移及转移播散。BSP耗竭亦与探索性小鼠模型中转移负荷降低相关。然而，鉴于动物样本量有限且仅用雄性小鼠，这些体内发现应谨慎解释，并需在更大规模、含两性的充分动力研究中确认。该文发表于《International Journal of Molecular Sciences》。
