中国北方山西省马匹中牛毛滴虫（Tetratrichomonas buttreyi）与人五鞭毛滴虫（Pentatrichomonas hominis）的分子调查与遗传特征分析

《Animals》：Molecular Survey and Genetic Characterization of Tetratrichomonas buttreyi and Pentatrichomonas hominis in Horses in Shanxi Province, Northern China

　　

毛滴虫（Trichomonads）为厌氧单细胞原生动物，常定殖于动物消化道。人五鞭毛滴虫（Pentatrichomonas hominis）为具人兽共患潜力的物种，兽医与公共卫生意义日益凸显；牛毛滴虫（Tetratrichomonas buttreyi）为肠道毛滴虫，其宿主范围与传播生态学尚未完全明确。中国马匹中两物种流行病学数据缺失。研究人员于2023年3—6月采集山西省大同、太原、运城三市631份马粪样，采用靶向小亚基核糖体RNA（SSU rRNA）基因的巢式PCR（nested PCR）检测。总分子阳性率：T. buttreyi为3.7%（23/631；95% CI 2.5–5.5%），P. hominis为0.8%（5/631；95% CI 0.3–1.9%）。T. buttreyi阳性率因地区与管理模式差异显著，与年龄、性别无关；P. hominis仅见于大同，地区差异显著，与年龄、性别、管理模式无显著关联。获5条代表性T. buttreyi序列与1条P. hominis序列；两条T. buttreyi序列与猪、牛、马参考序列100%同源，三条仅minor nucleotide variation；代表性P. hominis序列聚类于人兽共患CC1基因型。结果证实山西省马匹感染T. buttreyi与P. hominis，提供两物种基线分子流行病学数据，支持马—畜禽—人界面持续监测需求。

研究背景与立项依据：毛滴虫（Trichomonads）属副基体门（Parabasalia）厌氧鞭毛原生动物，部分种为脊椎动物肠道共生或寄生生物。牛毛滴虫（Tetatrichomonas buttreyi）原记述于猪，后见于牛消化道，致病性存争议；人五鞭毛滴虫（Pentatrichomonas hominis）宿主谱广，CC1基因型跨人畜高度相似，暗示人兽共患传播可能。形态学难区分近缘肠道毛滴虫，SSU rRNA基因巢式PCR为流行病学金标准。山西省为北方畜牧大省，马与人和畜禽环境共享，但省内马匹T. buttreyi与P. hominis分子流行与遗传特征零报道，马是否参与区域传播网络未知。该研究由山西农业大学兽医寄生虫病实验室完成，发表于《Animals》，旨在填补上述空白。

主要技术方法：研究人员建立631份马粪样本队列（太原俱乐部马261份、大同与运城放牧马370份，大同另含部分放牧样本，合计269份来自大同、101份来自运城，采样期2023年3—6月）。提取粪基因组DNA后，用巢式PCR扩增T. buttreyi 623 bp与P. hominis 339 bp的SSU rRNA片段；阳性产物Sanger双向测序，Chromas Pro拼接，BLAST比对GenBank；MEGA 7最大似然法（Kimura双参数+Γ模型，1000自举）建系统发育树；SPSS 26.0 Fisher精确检验与Fisher–Freeman–Halton检验做单变量关联分析，地区与管理因完全混杂不独立解释。

研究结果：

3.1 山西省马匹T. buttreyi与P. hominis流行率——631份中T. buttreyi阳性23份（3.7%），太原最高8.0%（21/261），大同0.7%（2/269），运城0；地区差异p<0.001；年龄（≥3岁3.7% vs <3岁3.3%，p=1.000）、性别（雄3.8%、雌3.6%、骟3.1%，p=1.000）无显著差异；俱乐部马8.0%高于放牧马0.5%（p<0.001）但因地域混杂不独立。P. hominis阳性5份（0.8%），全在大同（1.9%），太原运城0，地区p=0.043；年龄p=0.542，性别仅雌马检出p=0.686，放牧马检出1.4% p=0.080，同样混杂不可独立解释。

3.2 T. buttreyi序列遗传特征——23阳性获5单倍型（GenBank PZ306185–PZ306189）。PZ306185/186与国产猪源PP256577 100%一致，亦同于中国牛源MK880285、捷克马源AY886859、德国猪MK801506、菲律宾猪JX565058；余三条仅2–7个SNP，与参考序列99.2–99.8%一致，无indel。ML树归T. buttreyi支（自举86%），马源序列与牛猪驴灵长类序列交织，无马特异分支，分支短示SSU rRNA分化有限。

3.3 P. hominis序列遗传特征——5序列完全一致，代表序列PZ306191与国产狐源OM763804 99.7%一致；核心区101–342 bp与虎、狗、貉、驴、牛、山羊、人源CC1序列100%一致，仅1–100位3个SNP。ML树归P. hominis单系支（自举97%）CC1亚支，与人临床株及多动物宿主株交织，无马特异谱系。

讨论浓缩：研究首证山西马匹携T. buttreyi与P. hominis；T. buttreyi阳性率低于本省驴（25.4%）、牛（74.5%）、猪（49.2%），年龄性别无关联，环境密度与粪便管理或为驱动，但俱乐部—太原混杂使管理效应不可分；序列跨宿主高一致支持广宿主假设，但SSU rRNA分辨率不足，需MLST或全基因组验传播。P. hominis极低流行（0.8%）且限大同，与本省驴（0.7%）近似，单次粪PCR不能区分定植/过路/污染，无临床症状观察故马体致病性未明。局限为三市短时采样、地域管理混杂、SSU rRNA标记粗。

结论翻译：该研究提供中国北方山西省马匹感染T. buttreyi与P. hominis的首个分子证据，两物种总体低流行；所获T. buttreyi序列与家畜序列高度同源或一致，遗传分化有限；代表性P. hominis序列紧密聚类人兽共患CC1基因型，暗示马可能参与区域传播网络。结果为山西马毛滴虫提供基线数据，凸显未来需扩大采样、高分辨分型与临床观察，以明晰传播路径、宿主特异性及马源毛滴虫的One Health意义。