《Pathophysiology》：Subchronic Exposure to Low-Dose Cannabidiol (CBD) and Δ9-Tetrahydrocannabinol (Δ9-THC) Nanoemulsions Suggests Low Renal Toxicity: A Preliminary Study
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背景/目的：基于大麻素制剂的治疗用途日益增加，这凸显了需要更好地表征其安全性特征，尤其是在参与外源性物质清除的器官（如肾脏）中的安全性。本研究评估了雄性Wistar大鼠在亚慢性口服给予大麻二酚（CBD）和Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）纳米乳后的肾脏效应。方法
背景/目的：基于大麻素制剂的治疗用途日益增加，这凸显了需要更好地表征其安全性特征，尤其是在参与外源性物质清除的器官（如肾脏）中的安全性。本研究评估了雄性Wistar大鼠在亚慢性口服给予大麻二酚（CBD）和Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）纳米乳后的肾脏效应。方法：将四十只动物（每组n = 8）随机分为五组：溶媒对照组（Licuri油 + Pluronic? F127）、CBD 2.5 mg/kg组、CBD 5 mg/kg组、CBD+THC 2.5 mg/kg组和CBD+THC 5 mg/kg组。每日通过口服灌胃给药，连续21天。对肾脏样本进行组织病理学和免疫组织化学分析（Ki-67、GST-P和cleaved caspase-3）。结果：高剂量组（5 mg/kg）表现出显著的组织病理学改变，包括肾小管和肾小球损伤、出血区域、炎症浸润和坏死。与对照组相比，这些组的Ki-67和cleaved caspase-3免疫表达也增加。仅在CBD 5 mg/kg组中，GST-P表达显著增加。低剂量组未观察到显著变化。结论：这些发现表明，在实验条件下，与大麻素纳米乳暴露相关的肾组织形态学和分子改变呈剂量依赖性。
论文解读：大麻素纳米乳亚慢性暴露的肾脏安全性初探
研究背景与问题
大麻（Cannabis sativa L.）作为一种具有精神活性物质的历史性植物，长期以来在仪式和宗教实践中被使用，同时也是东亚最早栽培的物种之一。近年来，大麻类制剂的治疗应用日益增多，尤其是在慢性疼痛和神经系统疾病的对症治疗中。然而，大麻植物含有超过400种生物活性化学成分，其中最主要的植物大麻素为Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）和大麻二酚（CBD）。Δ9-THC主要负责精神活性效应，而CBD则可能拮抗部分精神活性作用，并因其潜在治疗价值而受到广泛研究。随着全球消费量增加，包括巴西在内的人群终生使用率约为7%至4%，深入了解大麻素的代谢和潜在毒性变得至关重要。肾脏作为外源性物质及其代谢物排泄的主要器官，可能成为药物诱导毒性的靶点。然而，现有研究大多聚焦于大麻素的药代动力学和全身效应，关于亚慢性暴露后肾脏特异性毒理学结果的数据仍然有限。此外，纳米乳递送系统虽能提高高亲脂性大麻素的溶解度、稳定性和生物利用度，但也可能改变其生物分布和毒性特征，因此需要专门的毒理学评价。本研究旨在评估含有CBD和Δ9-THC的纳米乳在不同浓度下经亚慢性口服暴露后，是否诱导雄性Wistar大鼠肾脏的组织病理学和免疫组织化学改变。研究人员假设，由于纳米乳增强生物利用度，大麻素可能诱导剂量相关的肾组织改变，这些改变可通过组织病理学和分子标志物检测到。
研究内容与结论
研究人员使用四十只雄性Wistar大鼠（8–9周龄，体重约280–300 g，每组n = 8），随机分为五组：溶媒对照组（Licuri油+Pluronic? F127）、CBD 2.5 mg/kg组、CBD 5 mg/kg组、CBD+THC 2.5 mg/kg组和CBD+THC 5 mg/kg组。每日口服灌胃给药，连续21天。实验结束后，取右肾进行组织病理学检查和免疫组织化学染色。结果显示，高剂量组（5 mg/kg）出现显著的肾组织病理学改变，包括肾小管和肾小球损伤、出血区域、炎症浸润和凝固性坏死；同时，Ki-67和cleaved caspase-3免疫表达较对照组显著增加。GST-P表达仅在CBD 5 mg/kg组显著升高。低剂量组（2.5 mg/kg）未观察到显著变化。结论表明，在实验条件下，亚慢性暴露于高剂量CBD和CBD+THC纳米乳与肾组织的形态学和分子改变相关，且呈剂量依赖性。由于未进行肾功能指标评估，这些结果仅反映组织水平和细胞水平的响应，而非明确的肾毒性证据。该研究发表在《Pathophysiology》。
关键技术方法
本研究使用了三种主要关键技术方法。第一，纳米乳制剂技术：将大麻素溶于Licuri油作为油相，以Pluronic? F127为表面活性剂的水相在磁力搅拌下混合形成预乳液，再通过探头超声（3 min，10 s开/10 s关，70%振幅）减小液滴尺寸，获得具有纳米级液滴尺寸、低多分散指数（PDI）和适当Zeta电位的稳定纳米乳。第二，组织病理学分析：肾脏组织经10%缓冲福尔马林固定、梯度酒精脱水、石蜡包埋后切成3 μm切片，进行苏木精-伊红（H&E）染色，采用半定量评分系统（0–3分）评估肾皮质病变严重程度，包括凝固性坏死、肾小管改变、肾小球损伤、出血区域和炎症浸润。第三，免疫组织化学分析：使用Ki-67（MIB-1）、胎盘型谷胱甘肽S-转移酶（GST-P）和cleaved caspase-3抗体检测细胞增殖、细胞应激/解毒和凋亡相关蛋白的表达，通过DAB显色和苏木素或Fast Green复染，采用盲法定量或半定量评估阳性细胞。所有统计分析采用Kruskal–Wallis检验和Dunn事后检验。动物来源于圣保罗联邦大学（UNIFESP）的CEDEME中心动物设施，研究经该校动物伦理委员会批准（协议号1480150923）。
研究结果
组织病理学发现：高剂量组（CBD 5 mg/kg和CBD+THC 5 mg/kg）与对照组相比，组织病理学评分显著升高（p < 0.05）。CBD 5 mg/kg组所有动物评分为3（严重），CBD+THC 5 mg/kg组中7只动物评分为3，1只评分为2。主要病变包括出血区域、肾小管和肾小球改变、炎症浸润以及凝固性坏死，偶见肾小球萎缩。低剂量组（CBD 2.5和CBD+THC 2.5 mg/kg）的评分与对照组无显著差异，多数为0或1分。对照组肾组织结构保存完好，均为0分。
Ki-67免疫组化：高剂量组（CBD 5和CBD+THC 5 mg/kg）的Ki-67阳性细胞数较对照组显著增加（p < 0.05），提示细胞周转或再生活动增强；低剂量组与对照组无显著差异。
GST-P免疫组化：仅CBD 5 mg/kg组的GST-P阳性细胞数较对照组显著增加（p < 0.05），其他处理组（包括CBD+THC 5 mg/kg）与对照组无显著差异，提示CBD单独高剂量可能激活细胞应激或解毒相关反应。
Cleaved caspase-3免疫组化：高剂量组（CBD 5和CBD+THC 5 mg/kg）的cleaved caspase-3免疫染色评分显著高于对照组（p < 0.05），表明凋亡相关通路激活；低剂量组无显著变化。
讨论与结论总结
讨论部分指出，高剂量大麻素纳米乳暴露引起的肾组织病理学改变与既往实验模型中观察到的肾小管变性、血管改变和细胞损伤一致，提示剂量依赖性结构变化。Ki-67升高反映细胞周期活性增强，但不能区分生理性再生与病理性增殖；cleaved caspase-3升高提示凋亡通路激活；GST-P升高在CBD 5 mg/kg组中可能反映细胞应激适应反应。然而，本研究仅评估了形态学和免疫组织化学终点，未检测血清肌酐、尿素、尿生物标志物、氧化应激或炎症因子，因此不能确定肾功能损伤或明确肾毒性。研究局限性包括仅使用雄性动物、缺少THC单独组，且结果不能外推至全谱大麻提取物。结论为：在实验条件下，亚慢性暴露于高剂量CBD和CBD+THC纳米乳与雄性Wistar大鼠肾组织的组织病理学和免疫组织化学改变相关；低剂量未观察到显著改变。这些发现应视为组织水平和细胞水平的响应指标，而非肾毒性的确证证据。未来需要结合功能、生化和机制研究，全面阐明大麻素纳米制剂的肾脏安全性特征。
