分散液液微萃取联用超高效液相色谱-荧光检测法测定茶叶中多环芳烃：方法开发、验证、绿色度评估及膳食暴露风险评估

《Food Chemistry: X》：Dispersive liquid-liquid microextraction coupled with ultra performance liquid chromatography-fluorescence detection for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in tea: Method development, validation, greenness assessment, and dietary exposure risk assessment

　　

研究人员提出了一种改进的分散液液微萃取（DLLME）联用超高效液相色谱-荧光检测（UPLC-FLD）方法，用于测定马来西亚市售茶叶中8种欧洲食品安全局（EFSA）推荐的多环芳烃（PAHs）。DLLME以二氯甲烷为萃取溶剂、甲醇为分散溶剂。分离采用C18柱，荧光检测激发波长270 nm，设4个发射波长。该方法线性良好，检测限（LOD）为3.87–32.5 ng L?1，精密度（RSD）≤9.91%，回收率85.13%–101.71%，富集因子（EF）35–48，绿色度评分（AGREE）0.53。对43份商品茶浸出液及花草茶（tisanes）的分析显示?（chrysene）为最常见PAH。∑PAH8平均总浓度趋势为：后发酵茶＞非发酵茶（31.61 ng kg?1）＞全发酵茶（17.10 ng kg?1）＞半发酵茶（8.35 ng kg?1）＞花草茶（4.28 ng kg?1）。各类别暴露边界（MOE）均高于临界安全阈值（10,000）。

研究背景与立项依据

茶是全球消费量仅次于水的饮品，按加工工艺分为非发酵、半发酵、全发酵及微生物（后）发酵茶，草本浸出液则称花草茶（tisanes）。PAHs为两个及以上稠合芳香环的有机污染物，源于生物质不完全燃烧及茶叶高温加工环节，具致癌与遗传毒性。传统液液萃取（LLE）与QuECHERS溶剂消耗大，固相萃取（SPE）成本高且不可复用；离子液体或低共熔溶剂DLLME需额外配制步骤。现有马来西亚市售茶EFSA八项PAH发生数据缺失。因此研究人员以马来西亚槟城与吉打州超市43份茶样为对象，开发DLLME-UPLC-FLD法并完成验证、绿色度评估及基于MOE的膳食风险评价。

主要关键技术方法

研究人员以马来西亚槟城与吉打州市售43份茶样（全发酵17、半发酵6、非发酵6、后发酵6、花草茶8）为队列，按ISO 3103制备95℃水浸6 min茶汤；采用三元体系DLLME（甲醇分散、二氯甲烷萃取、涡旋40 s、3000×g离心3 min、氮吹复溶）富集；UPLC选用Poroshell 120 EC-C18（1.9 μm）柱，梯度乙腈-水，FLD激发布270 nm、四发射通道；以基质匹配校准、ICH指南验证线性/LOD/LOQ/精密度/回收率；AGREE与AGREEprep评绿色度；以确定性EDI（C×IR/BW，IR=8.2 g·人^?1·d^?1，BW=70 kg）耦合EFSA的BMDL₁₀算MOE。

研究结果

3.1 优化UPLC-FLD条件：对比PFP与EC-C18柱，后者实现BbFA/BkFA基线分离；确立270 nm激发与385/405/420/510 nm分段发射，核心壳颗粒缩短扩散路径。

3.2 方法验证：基质匹配五点校准R²合格，LOD 3.87–32.5 ng L^?1，LOQ相应推演；日内（n=9）与日间（n=27）RSD≤9.91%；三水平加标回收85.13%–101.71%；EF 35–48；AGREE 0.53，AGREEprep单独评前处理。

2.2–2.4 样本与提取：2.0 g茶/100 mL 95℃水/6 min，10 mL茶汤经500 μL甲醇+400 μL二氯甲烷DLLME，氮吹至干，100 μL乙腈定容，0.22 μm尼龙膜过滤。

3.3 市售茶污染特征：43样中?检出率最高；∑PAH8均值后发酵＞非发酵（31.61 ng kg^?1）＞全发酵（17.10 ng kg^?1）＞半发酵（8.35 ng kg^?1）＞花草茶（4.28 ng kg^?1）。

3.4 暴露与风险：以马来西亚成人饮茶量推EDI，BaP、PAH2、PAH4、PAH8的MOE均＞10,000临界值，提示当前市售茶经茶汤摄入的遗传毒性致癌风险在EFSA框架内可接受。

讨论与结论翻译

讨论指出，DLLME-UPLC-FLD相较LLE/SPE溶剂用量微升级、无需专用SPE柱，AGREE 0.53反映其符合绿色分析化学（GAC）部分原则；首次给出马来西亚市售茶与花草茶EFSA八PAH本底，后发酵茶累积偏高或与渥堆高温及环境沉降有关。结论：所建方法灵敏度、精密度、回收率与绿色度满足商检例行监控；马来市场茶样∑PAH8低于风险阈值，MOE全类＞10,000，但后发酵茶为后续加工污染控制重点；该研究为监管机构提供基线数据与风险决策依据。论文发表于《Food Chemistry: X》。