抗凝剂肝素和天然血清改变了原代培养模型鱼鳃上皮的屏障及紧密连接特性

《Journal of Comparative Physiology B》：The anti-coagulating agent heparin and native serum alter the barrier and tight junction properties of a primary cultured model fish gill epithelium

　　

摘要

原代培养鳃模型对于研究鱼鳃上皮屏障特性很有用。通常，鳃细胞培养方法使用市售的异源血清补充剂，而不是天然血清。这是因为异源血清容易获得，并且有助于开发能很好模拟鳃的模型。此外，历史上天然血清（或血浆）在原代培养鱼类上皮模型中的成功与否不一。本研究考察了血液抗凝剂肝素和天然血清对原代培养虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）鳃模型屏障特性的影响。在肝素存在下上皮细胞的发育降低了跨上皮电阻（TER），并增加了 [3H]聚乙二醇（分子量 400 Da，PEG-400）的细胞旁路转运。与此同时，编码紧密连接（TJ）蛋白三联连接蛋白、闭合索蛋白 1、环带蛋白和闭合蛋白（cldn）-1、-8b、-8c、-8d、-12、-23a、-27b、-28b 和 -29a 的基因转录本丰度降低，而 cldn30 和 -32a 的 mRNA 丰度增加。用肝素进行 24 小时的急性处理对 TER 和细胞旁路渗透性有定性相似的影响，但对 TJ 相关基因的影响较小。相比之下，用 10% 虹鳟鱼血清（制备时未使用抗凝剂）替代 10% 胎牛血清，增加了 TER 并降低了细胞旁路 [3H]PEG-400 的渗透性。这与 ocln、cldn8b、-8d、-27b 和 -28b 转录本丰度的增加以及 Cldn-8d 蛋白丰度的增加有关。数据表明，天然细胞外液可以增强模型鳟鱼鳃的屏障特性，但应评估抗凝剂以确定其是否具有有害作用。