熟悉化与游离氨基酸混合物补充对凡纳滨对虾摄食反应的差异化影响

《Aquaculture Reports》：Familiarisation and amino acid supplementation differentially affect feeding responses in Penaeus vannamei shrimp

　　

摄食引诱剂在水产养殖中广泛用于增强摄食量并支持生长，但其评价需要稳健且标准化的测试方案。前期熟悉化指反复暴露于测试水槽以减轻新奇诱导的应激并将动物注意力重新导向被测试饲料。本研究考察前期熟悉化是否影响凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)幼虾(7.88±0.98 cm)的应激反应与摄食行为，并评估其在评价游离氨基酸混合物(mix of free amino acids, MFAA)吸引性与适口性中的相关性。实验1在中等挑战条件下使用虾日常饲料评估熟悉化：虾以1 h/d连续3 d熟悉化或不熟悉化至测试水槽，并在有或无饲料下测试。熟悉化对应激或摄食行为无影响，而饲料存在增加尾扇急弹(tail flips)并降低趋触性(thigmotaxis)。实验2在更具挑战性的条件（代表典型饲料评价测定）下评估熟悉化，即虾反复接触新奇饲料。熟悉化与非熟悉化虾依次接触四种饲料处理（无饲料、未包被空白饲料、包被0.5%或1% MFAA的空白饲料）。熟悉化提高饲料消耗量但未改善虾区分饲料的能力，令该耗时耗力的程序在摄食测试中的相关性存疑。无论是否熟悉化，虾均消耗更多MFAA包被饲料，证实其适口性。总体而言，结果表明熟悉化效应取决于测试情境，在虾遭遇新奇饲料时可能更有益。鉴于P. vannamei的经济重要性，细化测试程序对加强水产养殖饲料添加剂评价至关重要。

研究背景与立项依据：在水产养殖中，行为学测定广泛用于评价饲料吸引性(attractiveness)与适口性(palatability)，其中诱食剂可提升摄食量、改善生长并减少水体污染，对摄食缓慢的十足目甲壳类尤为关键。现有文献推荐在饲料测试中实施熟悉化（如测试前3 d每日30 min暴露于测试水槽），以降低新奇诱导应激、减轻新异物厌食(hyponeophagia)并聚焦动物对目标饲料的注意力；然而针对凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)这一全球主导养殖种，前期熟悉化对应激反应与摄食行为的实际增益从未被定量验证，且该程序耗时耗力，其必要性存疑。同时，L-氨基酸作为三类主要诱食剂之一，其混合物效能具物种特异性且存在化学互作（抑制或协同），须通过摄食测定实验评估。为此，研究人员在《Aquaculture Reports》报道了两项实验，旨在辨析熟悉化在“低新奇”（仅器具新奇）与“高新奇”（器具与饲料均新奇）情境下的真实作用，并同步验证家禽角蛋白水解所得17种游离氨基酸混合物(MFAA, Kera-Stim?50)的诱食价值。

主要关键技术方法：研究分两批购入奥地利白豹虾场凡纳滨对虾幼虾（2.52±0.82 g，7.88±0.98 cm），运抵法国Halieutica站于人工海水中驯养（盐度25 g·L^?1、30 °C、红滤光LED 9:00–17:00）。测试前1 d按3尾/组转入塑料缸。熟悉化协议为测试前连续3 d每日1 h全体入测试水槽；测试日组群经15 min红外光下适应后拉起滑门录像20 min。实验1为2×2因子（熟悉化×有/无日常饲料），n=20组；实验2为熟悉化组与非熟悉化组各10组，顺序随机接受无饲料、空白植物性禽料、0.5% MFAA包被、1% MFAA包被四种处理。行为学由BORIS v.7.13.8计尾扇急弹与螺旋游动(loops)，AnimalTA v.3.2.1追踪趋触性（距壁3 cm内，剔除采食邻壁区）、采食区停留、潜伏期、进入次数及平均距离；摄食量以70 °C烘干残饵称重折算。统计用R 4.2.1，正态变量走双因素ANOVA（组为随机因子），非正态走permuco包5000次置换ANOVA，比例数据用Fisher精确检验，事后FDR或Holm校正。

研究结果

3.1 实验1：前期熟悉化与测试中熟悉饲料存在效应

在中等挑战条件（仅水槽新奇、饲料为日常料）下，熟悉化对尾扇急弹中位数、趋触性时间、摄食量、采食区停留、潜伏期、过渡次数及距离均无显著影响（p>0.05）。饲料存在使尾扇急弹个体比例升高（p=0.007），趋触性时间缩短（p=0.031），但未改变摄食量与其他采食指标。全实验未见loops。结论：低应激背景下熟悉化无行为学可检出收益，饲料出现引发竞争相关尾扇急弹而非纯应激反射。

3.2 实验2：前期熟悉化对后续典型摄食测试的影响

在高新奇条件（连续接触空白料与MFAA包被料）下，熟悉化主效应不改善尾扇急弹、趋触性或任何空间采食指标，但使总摄食量显著升高（p=0.0006）；处理主效应中0.5%与1% MFAA包被料摄食量均显著高于空白料（p<0.05），熟悉化×处理无交互（p=0.750）。结论：熟悉化在饲料本身新奇时通过缓解新异物厌食而提升摄入量，但不提升虾对饲料间吸引性差异的分辨力；MFAA证实为有效适口性增强剂而非远距离引诱剂。

讨论浓缩：熟悉化未减应激与前人（如海七鳃鳗Petromyzon marinus对报警信息素习惯化）看似矛盾，实则本平台红外光+严控水质致应激地板效应（无loops、尾扇低频），行为通道不足以显形，生理标记或更敏感。摄食量增益仅现于实验2，支持“环境熟悉释放对新奇饲料的注意”与hyponeophagia框架；羊羔熟境多食为平行证据。但熟悉化未像孔雀鱼研究那样助益刺激分辨，动摇了低应激受控下冗长熟悉化的常规地位。饲料存在致尾扇急弹归因为群养竞争（单养无此现象），实验2新奇料将注意从竞争转向探索故尾扇不升；趋触性下降不等于近料，因采食区指标未变。MFAA增效源于角蛋白水解液富甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、精氨酸、谷氨酸——这些恰是P. vannamei猎物组织常见且口器/步足刚毛(setale on mouthparts and pereiopods)识别的适口性信号；而嗅觉性吸引由触角鞭节嗅毛(aesthetascs setae on antennules)介导，本装置无水流、投料时机与10 cm水深致化学梯度未成，故潜伏期无差——提示引诱评价须优化扩散动力学。空白料虽含赖氨酸、蛋氨酸但游离态低，仍被少量摄食，印证氨基酸谱而非单一氨基酸决定适口。

结论翻译：本研究证明凡纳滨对虾测试水槽前期熟悉化效应具情境依赖性。其虽在减轻应激相关行为上作用有限，但在虾接触新奇饲料时通过缓解新奇诱导摄食抑制（hyponeophagia）提升了摄食量。然而熟悉化未改善饲料分辨力，限制了其作为摄食测定标准环节的价值。结果提示细化实验条件可能比系统性熟悉化更关键。此背景下MFAA被证有效为适口性增强剂但未增加饲料吸引性。综上，这些发现有助于提升水产养殖摄食测定的可靠性与相关性。