自然选择驱动宽节裂头绦虫（Ligula intestinalis (Linnaeus, 1758) Gmelin, 1790）（绦虫纲：双叶槽目）线粒体基因组密码子使用偏倚：基于比较基因组学与最优密码子鉴定的启示

《Animals》：Natural Selection Drives Codon Usage Bias in the Mitochondrial Genome of Ligula intestinalis (Linnaeus, 1758) Gmelin, 1790 (Cestoda: Diphyllobothriidea): Insights from Comparative Genomics and Optimal Codon Identification

　　

在人医学中，DNA错配修复（MMR）系统异常与多种癌症相关，但MMR蛋白在犬原发性肺腺癌（PPC）中的表达尚未被表征。研究人员对17例犬PPC进行临床信息收集、大体和显微镜检查及免疫组织化学评估，检测MSH2与MSH6两种MMR蛋白表达，结果显示肿瘤间染色存在差异，部分病例无免疫反应性；MSH2表达降低与肿瘤体积增大显著相关（p = 0.006）。该研究首次描述犬PPC中MSH2和MSH6的免疫组化表达，并为未来探究MMR蛋白在犬肺肿瘤中的潜在相关性提供初步数据。受限于仅评估MSH2和MSH6且未行微卫星不稳定性或分子分析，所见异常不能解释为功能性MMR缺陷的决定性证据。

研究背景与问题提出

犬原发性肺腺癌（PPC）是老年犬少见的原发性肺肿瘤，以腺癌为主，其分子特征尤其DNA修复通路参与情况知之甚少。人医中DNA错配修复（MMR）系统通过MutSα异二聚体（含MSH2与MSH6）识别并纠正复制错误，缺失可致微卫星不稳定性（MSI）并见于部分肺癌，但兽医领域MMR通路在自发肿瘤中的作用未明，犬PPC中MSH2/MSH6表达此前未见报道。为此，研究人员旨在表征犬PPC中MSH2与MSH6的免疫组化表达，并分析其与临床病理参数的关联。本研究发表于《Animals》。

主要技术方法概括

研究回顾性纳入2020–2025年罗马尼亚两机构确诊的17例犬PPC石蜡样本，要求具MCK（多细胞角蛋白）和TTF-1（甲状腺转录因子1）支持原发肺上皮分化且无肺外原发灶。技术人员进行H&E组织学分类与有丝分裂计数（10个高倍野总面积2.37 mm2），并以自动化（MCK、TTF-1）和手动（MSH2克隆79H11、MSH6克隆EP49，人源抗交叉反应经BLAST验证犬同源蛋白一致性94.1%与92.8%）免疫组化染色，按阳性核比例与强度算免疫反应评分（IRS 0–12）。统计采用SPSS非参数Spearman相关，肿瘤体积以椭球公式估算，所有分析为探索性。

研究结果

3.1 流行病学与临床特征：17例以混种犬（41.2%）居多，雌犬占76.5%，中位确诊年龄10.6岁（6–17岁），符合PPC老龄倾向。

3.2 大体发现：肿瘤多边界清（64.7%），切面灰白至棕黄伴坏死出血，体积2.2×1.8至12.5×11 cm，8例可评淋巴结均无肉眼转移。

3.3 组织病理学发现：全部为未包裹浸润性癌，以乳头状腺癌（88.2%）为主，另见腺鳞癌与伏壁型各1例；有丝分裂9–32/2.37 mm2，常见坏死、血管侵犯与间质炎细胞浸润，3例淋巴结组织学无转移。

3.4 免疫组化发现：MCK胞质弥漫强阳、TTF-1核阳（17/17）支持肺上皮来源；MSH2核表达缺失3例（17.6%），IRS负性3例、弱2例、中6例、强6例；MSH6缺失2例（11.8%），IRS分布类似。邻旁正常肺内支气管与淋巴细胞作内对照均保表达。

3.5 统计分析：MSH2与MSH6的IRS无显著相关（ρ=0.317, p=0.215）；二者与有丝分裂指数无关；MSH2的IRS与肿瘤体积显著负相关（ρ=?0.634, p=0.006），即体积越大MSH2越低，MSH6无此关联。

讨论浓缩

犬PPC临床病理同既往报道，MCK/TTF-1确认表型。多数肿瘤保留MSH2/MSH6表达，少数个体蛋白表达改变（17.6%与11.8%），但无双缺失、未测MLH1/PMS2、未行MSI，故不能判为功能性dMMR。此频率低于人结直肠癌而近似人肺癌（MMR缺陷少见）。MSH2低表达与大体积相关机制未明，或反映进展期异质性。局限为回顾性小样本、仅两蛋白、缺分子验证。研究首报犬PPC中MSH2/MSH6表达谱，为后续全MMR面板与MSI研究奠基。

结论翻译

本研究首次表征犬PPC中MSH2和MSH6免疫组化表达。所评肿瘤经MCK与TTF-1确认一致肺上皮分化，形态同前报犬PPC。多数肿瘤保留两蛋白核表达，子集呈单蛋白减/缺表达。结果指示犬PPC子集可现MSH2或MSH6表达改变，但不构成功能性MMR缺陷或整体通路破坏；MSH2下调与体积增大之关联或涉肿瘤进展，但方向与生物学意义未定。需更大队列、全MMR免疫组化、MSI及分子分析以明其意。本数据为犬肺癌变DNA修复机制深入研究提供初步依据。