《Tissue and Cell》：piR-hsa-157573 promotes oral squamous cell carcinoma progression via interacting with hnRNPM
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•piR-hsa-157573在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中表达上调。•piR-hsa-157573作为一种致癌piRNA，在体外和体内环境中促进OSCC细胞的增殖、迁移和肿瘤生长。•piR-hsa-157573直接与hnRNPM结合，并通过多种实验验证其在OSCC细胞中正向
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piR-hsa-157573在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中表达上调。
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piR-hsa-157573作为一种致癌piRNA，在体外和体内环境中促进OSCC细胞的增殖、迁移和肿瘤生长。
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piR-hsa-157573直接与hnRNPM结合，并通过多种实验验证其在OSCC细胞中正向调节hnRNPM的蛋白质表达。
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发现了一种新的piR-hsa-157573-hnRNPM调控轴，有助于理解piRNA的调控机制。
引言
口腔癌主要指发生在口腔黏膜的上皮恶性肿瘤，是头部和颈部地区最常见的癌症之一。根据国际疾病分类（ICD），口腔癌包括起源于口腔各部位的癌症。超过90%的口腔癌病例由鳞状细胞癌（SCC）引起[1]。口腔鳞状细胞癌（OSCC）以高复发率和较差的预后著称[2]。根据GLOBOCAN（全球癌症观察站）的数据，预计到2040年，OSCC的发病率将增加约40%，每年新增病例数将达到10,000例[3]。通常，口腔癌首先在常规口腔检查中被发现，随后通过细针穿刺和病理诊断进行确诊[4],[5]。由于缺乏早期诊断的生物标记物和治疗靶点，临床诊断往往延迟，导致预后不良。尽管多学科团队和序贯化疗可以改善治疗效果，但OSCC患者的五年生存率仍约为50%，其中25%至50%的患者会在治疗后出现局部复发和远处转移[6],[7]。因此，探索OSCC进展的潜在机制并识别准确的生物标记物可能会为早期癌症检测提供新的方法。
PIWI相互作用的RNA，即piRNAs，于2006年首次被发现。piRNAs的长度在24到32个核苷酸之间，在5'末端具有显著的尿嘧啶偏好，在3'末端具有2'-O-甲基化[8]。在所有非编码RNA中，piRNAs是最丰富和多样的小非编码RNA。这些分子来源于各种基因组序列。到目前为止，已在人类基因组中鉴定出超过30,000种piRNAs[9]。piRNAs存在于循环细胞和血清中，与维持基因组稳定性、调控表观遗传学以及生殖干细胞的分化密切相关。piRNAs的主要作用是沉默可移动元件（TEs）[10]。TEs没有蛋白质编码或与生物体相关的调控功能。某些应激条件和其他环境刺激可以触发特定TE家族的活性爆发，导致新的TE插入[11]。这些变化可能会影响基因表达模式和表型。然而，piRNA途径可以减少这些可逆的突变[12]。此外，与微小RNA（miRNAs）不同，piRNAs可以引导与其相互作用的PIWI蛋白降解目标转录本、促进异染色质组装并介导DNA甲基化[13]。越来越多的研究表明，piRNAs在多种人类癌症中表现出异常表达，并在调控恶性进展中发挥作用。尽管如此，piRNAs在OSCC发展中的作用仍不完全清楚。
本研究揭示了piR-hsa-157573在OSCC组织中显著上调，并增强了OSCC的发生和发展。从机制上看，piR-hsa-157573可以直接与hnRNPM结合，而hnRNPM在不同恶性肿瘤中含量丰富，从而调控hnRNPM的表达。总体而言，这项研究表明piR-hsa-157573可能成为OSCC的潜在治疗靶点，并为理解OSCC发展的基本机制提供了关键见解。
章节摘录
患者样本收集
来自中国山东青岛大学附属医院的患者提供了原发性OSCC肿瘤组织及其相邻正常组织的配对样本（n=3）。仅纳入了病理诊断为OSCC的患者。本研究获得了青岛大学及其附属医院的医学伦理委员会批准（批准编号：QYFY WZLL 30271）。所有参与者均签署了书面知情同意书。所有组织样本均保存在-80°C条件下。
细胞培养、转染和慢病毒感染
购买了SCC25和CAL27细胞
piR-hsa-157573在OSCC组织中高度表达
为了鉴定调控OSCC的关键piRNAs，我们从三名OSCC患者手中收集了肿瘤组织及其相邻的正常组织（n=3），并基于RNA-seq对其piRNA表达进行了分析（图1A）。总共鑑定了67种在OSCC组织中上调和7种下调的piRNAs（图1B）。然后，根据P < 0.05的标准，选出了接下来研究中需要关注的五种上调piRNAs。为了进一步筛选目标piRNA，我们对11对OSCC组织进行了qRT-PCR分析。结果显示，
讨论
本研究表征了PIWI相互作用的RNA piR-hsa-157573，它作为促进肿瘤发展的RNA在OSCC中起作用，并确定了piR-hsa-157573在OSCC细胞和组织中的上调情况。piR-hsa-157573既存在于细胞质中也存在于细胞核中，主要分布在细胞核中。作为一种非编码RNA，piR-hsa-157573的过表达显著促进了OSCC的增殖和迁移。相反，敲低piR-hsa-157573可以抑制口腔癌细胞的增殖和迁移
伦理声明
本研究遵循《赫尔辛基宣言》进行，并获得了青岛大学及其附属医院的医学伦理委员会批准（批准编号：QYFY WZLL 30271）。性别术语符合WHO指南。动物实验严格遵循ARRIVE（动物研究：体内实验报告）指南。所有程序均符合NIH（国家研究委员会）关于实验室动物护理和使用的指南以及相关的国家标准
资金来源的作用
本研究得到了青岛科技惠民示范与引导项目（项目编号：23-2-8-smjk-6-nsh）、国家自然科学基金（项目编号：52203173）和山东省自然科学基金（项目编号：ZR2022QH283）的支持。资助方未参与研究设计、数据收集与分析、手稿撰写或决定投稿发表。所有作者均可以完全访问所有数据
CRediT作者贡献声明
袁长青：撰写 – 审稿与编辑、项目管理、资金争取、概念构思。郭芳泽：撰写 – 审稿与编辑、形式化分析。冯云齐：撰写 – 初稿撰写、验证、软件使用、方法学、概念构思。徐文华：撰写 – 审稿与编辑、监督、项目管理。王青高：验证、方法学。王晓敏：撰写 – 审稿与编辑、方法学。
利益冲突声明
作者声明本研究在没有任何可能被解释为潜在利益冲突的商业或财务关系的情况下进行。
致谢
我们感谢杭州连川生物技术有限公司在RNA-seq分析方面的协助。LC-MS/MS服务由上海应用蛋白质技术有限公司提供。
作者协议声明
我们签署人声明本手稿是原创的，此前未发表过，目前也没有其他地方在考虑发表。我们确认所有列出的作者都已阅读并批准了本手稿，并且没有其他人符合发表条件
冯云齐|郭芳泽|王青高|王晓敏|徐文华|袁长青
