精氨酸 374 和精氨酸 393 参与猪细小病毒 1 型 VP2 病毒样颗粒的血凝活性及细胞吸附

《BMC Veterinary Research》：Arg374 and Arg393 contribute to the hemagglutination activity and cell attachment of porcine parvovirus 1 VP2 virus-like particles

　　

摘要

背景

猪细小病毒 1 型（PPV1）是一种与生殖障碍相关的重要猪病原体。VP2 衣壳蛋白是 PPV1 的主要结构蛋白，能够自组装成病毒样颗粒（VLPs），为研究衣壳结构和功能提供了有用的模型。然而，参与血凝和细胞附着的具体 VP2 残基仍定义不清。

结果

在本研究中，通过对代表性原细小病毒的序列比对和结构比较，确定了 PPV1 VP2 中的两个候选表面残基，Arg374 和 Arg393。利用定点突变技术生成了 R374K 和 R393G 突变体，并使用杆状病毒 - 昆虫细胞系统进行表达。SDS-PAGE、Western blotting 和透射电镜证实，两种突变体均能有效形成 VLPs，其形态与野生型 VP2 相当，表明这些取代不影响衣壳组装。功能测定表明，这两种突变均消除了血凝活性。此外，间接免疫荧光测定显示，用 R374K 或 R393G 突变体 VLPs 处理的 PK-15 细胞（猪肾上皮细胞系）中未观察到可检测的细胞相关 VP2 信号，而用野生型 VLPs 处理的细胞中则观察到清晰的 VP2 特异性荧光信号。

结论

这些结果确定 Arg374 和 Arg393 为 PPV1 VLPs 中与血凝和衣壳 - 细胞相互作用特性相关的 VP2 表面残基。本研究提供了残基水平的功能证据，有助于理解 PPV1 衣壳表面特性以及原细小病毒中的结构 - 功能关系。