德布勒森大学神经系统组织库的新建：介绍与回顾性数据分析

《Cell and Tissue Banking》：Establishment of a novel human nervous system tissue bank: University of Debrecen tissue bank—introduction and retrospective data analysis

　　

从尸检获取的人脑组织和从活检获取的肌肉与神经样本，是研究神经精神疾病病理机制转化医学不可或缺的资源。研究人员介绍了德布勒森大学神经系统组织库（Nervous System Tissue Bank），其包含福尔马林保存及福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）脑样本，以及冷冻的神经与肌肉活检标本，并建立了涵盖临床与病理参数的数据库。对于尸检病例记录性别、年龄、住院天数、入院诊断、合并症、死因、死后间隔（PMI）、全身尸检发现及脑大体与显微病理诊断；对于活检样本记录性别、年龄、活检部位及显微与分子遗传诊断。基于记录参数及其时间变化进行回顾性统计分析。共有2425例死亡个体的福尔马林固定脑样本与FFPE蜡块，以及257例患者的神经/肌肉样本，脑样本时间跨度为1990至2012年。最常见入院诊断为缺血性卒中（n=1070）、出血性卒中（n=462）、蛛网膜下腔出血（n=102）、癫痫（n=103）、脑转移瘤（n=70）、原发性脑肿瘤（n=60）、帕金森综合征（n=28）、痴呆（n=21）与肌萎缩侧索硬化（n=21）。高血压（67.6%）与糖尿病（20.1%）患病率随时间显著上升（p<0.001），而恶性肿瘤、痴呆、帕金森综合征及精神障碍患病率保持稳定。该组织库为匈牙利最大的神经系统样本集合，提供关联近三十年临床数据的高表征脑、肌肉与神经样本，向研究人员开放。

研究背景方面，众多神经与精神疾病的病理生理机制仍不清楚，给社会带来沉重负担，亟需早期有效诊断与疗法。基础研究虽可用细胞系、类器官与动物模型，但疾病特异性分子微环境最贴合人体组织，而人脑样本因法律、成本与获取难度受限，脑活检仅作诊断兜底，尸检成为科研用脑主要来源；外周神经与肌肉则更多依赖活体活检。福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本长期被认为不适于分子分析，但近年研究证实在合适技术下亦可提取DNA/RNA做短扩增子分析，且长期存储形态稳定。全球尸检率自半数世纪前约60%降至低于5%，导致合并症与并发症漏诊，也缩减了科研样本来源。在此背景下，研究人员依托匈牙利德布勒森大学神经内科1990–2012年尸检脑样本与2014–2018年外周神经肌肉冷冻活检样本，建立神经系统组织库并做回顾性数据挖掘。

主要关键技术方法上，中枢神经系统样本来自德布勒森大学神经内科死亡患者尸检，脑取出后称重大体检查，10%磷酸缓冲福尔马林固定三周，按Spielmeyer技术切冠状片与脑干薄切片，2010年前仅取病灶区做H&E，2010年起按BrainNet Europe方案标准化取额中回、海马、杏仁核、丘脑等区域并加β-淀粉样蛋白、α-突触核蛋白、tau、TDP-43免疫组化与Luxol fast blue髓鞘染色；外周神经系统样本为2014–2018年存活患者腓肠神经（sural nerve）与三角肌/股四头肌等肌肉活检，剩余组织液氮速冻存于-80℃。数据库整合性别、年龄、住院日、入院诊断、高血压/糖尿病/恶性肿瘤/痴呆/帕金森综合征/精神障碍等合并症、死因、PMI、神经病理宏观微观诊断；统计用STATA做线性与logistic回归。

研究结果部分，“中枢神经系统组织”小节指出库内2425例福尔马林固定全脑冠状切片加分区FFPE蜡块；“年度样本数变化”显示1990年代至2007年前每年>95例，2007年后锐减；“性别分布”中男性1313例（54.14%）多于女性1112例（45.86%），仅少数年份女性居多；“死亡年龄变化”中位数72岁，线性回归显示随年显著上升（p<0.0001）；“住院至死亡天数”中位数6天，随年显著下降（p<0.0001）；“入院主因”前三位为缺血性卒中1070、出血性卒中462、癫痫103；“高血压”患病率67.6%随年升（OR 1.0388, p<0.001）；“糖尿病”20.1%随年升（OR 1.037, p<0.001）；“癌症”12.3%无时间变化；“痴呆”临床诊断3.6%无变化，但神经病理复评发现38例阿尔茨海默病（Braak I–II 11例、III–IV 21例、V–VI 6例）与2例弥漫性路易小体病；“帕金森综合征”4.5%无变化；“精神障碍”3.8%无变化；“死因分布”28.1%直接源于神经病，71.9%为肺栓塞、肺炎、心梗等非神经原因；“外周神经样本”257例中神经活检33例（皆腓肠神经）、肌肉224例，女多于男，神经诊断含遗传性/炎性/淀粉样神经病，肌肉含肌营养不良、肌炎、线粒体肌病。

讨论部分总结：该库是匈牙利最大、欧洲少见的中枢+外周神经联合库，不再新增样本而以向非盈利科研释放存量为目标，配套匿名化数据库与www.udtissuebank.com门户。研究人员指出尸检数2007年后下滑与国际趋势一致；男性死亡偏多符合欧洲性别差异文献；死亡年龄上升缘于心脑血管与肿瘤诊疗改善致寿命延长；住院日缩短反映可治患者存活率提升、尸检群体偏向难治重症；卒中/脑肿瘤/癫痫为主诊断契合GBD数据，但头痛类门诊病不入院故缺席，痴呆临床漏诊率高于流行病学因急性期认知评估受限。高血压与糖尿病合并症上升与西班牙等预防项目见效国相反，提示匈牙利基层预防待加强；肿瘤谱以肺、结直肠、乳腺为主与全球一致；多数神经科死者死于制动相关血栓/感染/心衰而非原发病，强调需主动防制非神经并发症。局限性为回顾性设计、2010年前取样非标准、急性卒中选样偏倚致神经退行病低估、尸检率本身随时间变而干扰趋势。

结论翻译：本研究呈现了匈牙利一新神经系统组织库的建立，及建库过程中累积数据所推导的统计推论，反映了德布勒森神经内科22年诊疗画像。过往存储的人体样本是现代技术可启用的科研遗产；该库独特之处在于联动生前神经内科治疗死亡者的脑样本与疑似神经肌肉病活体神经肌肉活检。研究人员复盘历史材料并挂钩临床-病理-尸检数据，不再增补案例而以向引言所述人组织研究者全量释放样本为旨，建匿名库与网站udtissuebank.com，研究协议非营利且需与大学签协定。该库为匈牙利最大、欧洲层面也属罕见；同期国内Semmelweis大学Palkovits教授用“Palkovitz穿刺技术”深冷微块存约280脑。1990–2012脑样本回顾揭示：尸检量2007后不可逆下滑、男多于女、死亡年龄升、住院日降、卒中为主因、高血压糖尿病合并症升、肿瘤稳、痴呆帕金森精神科稳、七成死因为非神经并发症。研究彰显尸检对医疗质量反馈与科研样本供给的双重价值。