《Frontiers in Neurology》：Peptides whose levels change during the attack period in episodic migraine: NETRIN-1 and amylin
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摘要
目的：神经炎症在偏头痛病理生理学中的作用日益受到重视。本研究旨在评估发作性偏头痛（episodic migraine）患者血清netrin-1和胰淀素（amylin）水平。
方法：研究纳入60例诊断为发作性偏头痛的患者和30例健康对照者。患者在发作期（i
摘要
目的：神经炎症在偏头痛病理生理学中的作用日益受到重视。本研究旨在评估发作性偏头痛（episodic migraine）患者血清netrin-1和胰淀素（amylin）水平。
方法：研究纳入60例诊断为发作性偏头痛的患者和30例健康对照者。患者在发作期（ictal，n = 25）或发作间期（interictal，n = 35）进行评估。根据是否存在先兆进一步分组（有先兆偏头痛，n = 25；无先兆偏头痛，n = 35）。
结果：偏头痛组血清netrin-1水平显著低于对照组（492.7 ± 638.0 pg/mL vs. 744.8 ± 754.7 pg/mL，p = 0.038）。尽管偏头痛患者的胰淀素水平也较低（324.9 ± 451.7 ng/mL vs. 453.7 ± 490.2 ng/mL），但该差异未达到统计学显著性（p = 0.141）。在有先兆与无先兆患者之间，以及发作期与发作间期之间，netrin-1和胰淀素水平均未观察到显著差异。ROC分析中，netrin-1水平在区分偏头痛患者与对照组方面表现出显著的诊断性能（AUC = 0.635；95% CI：0.512–0.758；p = 0.031）。胰淀素的ROC分析不显著（AUC = 0.596，p = 0.133），而联合模型的AUC为0.636（p = 0.036）。
结论：发作性偏头痛患者血清netrin-1水平显著低于健康对照组，胰淀素水平亦呈下降趋势。需要进一步大规模研究来阐明这些生物标志物在偏头痛中的临床意义和病理生理作用。
论文解读
偏头痛是一种常见的神经系统疾病，全球患病率约为15.1%，女性受影响比例约为四分之一，男性约为十分之一。由于偏头痛多发于年轻人群，且该人群对经济有重要贡献，因此偏头痛对头痛期间劳动力的负面影响使其在神经系统疾病中占有重要地位。根据《国际头痛疾病分类》第三版（ICHD-3），发作性偏头痛（episodic migraine, EM）定义为每月头痛天数少于15天，而慢性偏头痛则为每月头痛天数≥15天且持续超过3个月，其中至少8天符合偏头痛标准或对偏头痛特异性治疗有效。偏头痛慢性化的潜在机制尚未完全阐明，但公认炎症在一定程度上参与其中，神经源性神经炎症可导致三叉血管系统神经元和胶质细胞中蛋白激酶激活及细胞因子表达增加。netrin-1属于层粘连蛋白样蛋白家族，最初被定义为强效化学吸引剂，参与胚胎发育中的细胞迁移，并在炎症、组织重塑、血管生成和癌症调控中发挥作用。netrin-1可通过激活其受体抑制单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的运动，从而影响免疫反应，且在多种自身免疫和炎症性疾病中观察到其显著下调。胰淀素（amylin，即胰岛淀粉样多肽）由胰腺β细胞与胰岛素共同分泌，与降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）结构相关，属于降钙素肽家族，共享部分受体和生物活性。amylin及其受体存在于参与偏头痛疼痛调节的三叉血管系统等不同结构中，且amylin类似物普兰林肽（pramlintide）输注可触发近半数偏头痛患者的偏头痛发作，提示其可能独立于CGRP及其受体发挥作用。然而，netrin-1和amylin在发作性偏头痛中的水平尚未被同时评估。因此，本研究旨在评估发作性偏头痛患者血清netrin-1和amylin水平，并探讨偏头痛频率、严重程度等临床因素对这些分子变异的影响。
本研究为单中心病例对照观察性横断面研究，于2024年1月至4月在土耳其Necmettin Erbakan大学医院神经内科门诊招募受试者。共纳入60例符合ICHD-3标准的发作性偏头痛患者和30例健康对照者。患者中25例处于发作期（ictal），35例处于发作间期（interictal）；有先兆偏头痛（migraine with aura, MWA）25例，无先兆偏头痛（migraine without aura, MWoA）35例。研究排除了年龄小于18岁、药物过度使用性头痛、其他原发或继发性头痛、妊娠、月经期、使用CGRP拮抗剂、血管炎、风湿免疫病、活动性感染、恶性肿瘤以及近期使用过镇痛药或曲普坦类药物者。研究人员采集静脉血，离心后取血清，采用BT LAB Human Netrin-1（Ntn1）和BT LAB Human Islet Amyloid Polypeptide（IAPP）Amylin酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测血清netrin-1和amylin水平。统计学方法包括Mann-Whitney U检验、受试者工作特征（ROC）曲线分析、敏感度/特异度及阳性/阴性预测值计算、Spearman相关性检验。
研究结果部分包含以下主要内容：
**患者与对照组的人口统计学特征**：患者组中位年龄为32.5岁，88.3%为女性；对照组中位年龄为26.5岁，76.7%为女性，两组年龄存在统计学差异（p = 0.020），性别、体质指数（BMI）和吸烟率无显著差异。患者组平均每日饮水量为1550 cc，平均每日咖啡因饮料摄入量为800 cc，平均MIDAS评分为16.5，HIT-6评分为57。合并症中甲状腺功能减退（11.7%）、高血压（5%）和2型糖尿病（3.3%）最常见。36例（60%）患者存在睡眠障碍，21例（35%）患者有规律运动习惯。
**netrin-1和amylin水平的组间比较**：与健康对照组相比，发作性偏头痛患者血清netrin-1水平显著降低（492.7 ± 638.0 pg/mL vs. 744.8 ± 754.7 pg/mL，p = 0.038）；amylin水平虽也低于对照组（324.9 ± 451.7 ng/mL vs. 453.7 ± 490.2 ng/mL），但差异未达到统计学显著性（p = 0.141）。有先兆偏头痛与无先兆偏头痛患者之间，以及发作期与发作间期之间，netrin-1和amylin水平均无显著差异。无论处于发作期还是发作间期，偏头痛患者的这两种分子水平均低于对照组。
**netrin-1和amylin水平与临床参数的关系**：相关分析显示，头痛严重程度及临床分类所用评分量表与netrin-1和amylin水平存在一致性，提示这些分子可能与偏头痛的临床特征相关。
**ROC曲线分析**：血清netrin-1水平在区分偏头痛患者与健康对照时表现出显著诊断性能，AUC为0.635（95% CI：0.512–0.758，p = 0.031）；amylin单独诊断性能不显著（AUC = 0.596，p = 0.133）；联合模型的AUC为0.636（p = 0.036），但amylin的加入未显著提高诊断效能。区分发作期与发作间期、有先兆与无先兆的ROC分析均未观察到显著结果。
讨论部分指出，netrin-1水平在发作性偏头痛患者中显著降低，且与偏头痛发作状态无关，这提示偏头痛患者即使在不发作时也可能存在脑内炎症和结构性改变。净rin-1在炎症条件下可稳定血脑屏障、减少神经炎症，并在缺血性卒中、阿尔茨海默病和帕金森病中观察到水平下降。amylin属于CGRP家族，既往研究发现amylin可诱导头痛，但其短半衰期及受体水平浓度测定的局限性可能影响了本研究中amylin的统计结果。研究局限性包括样本量较小、单中心设计、患者与对照组年龄和性别存在差异，以及未对同一患者发作期与发作间期的个体内变化进行纵向比较。
研究结论：理解偏头痛病理生理过程中脑结构和功能变化的分子机制及影响这些变化的细胞机制，对于识别反映偏头痛患者炎症相关变化的生物标志物、确定预后和治疗目标至关重要。本研究发现，发作性偏头痛患者血清netrin-1水平较健康对照组降低，且发作期与发作间期无显著差异；同时，发作性偏头痛患者的netrin-1和amylin水平在发作期和发作间期均低于对照组。这些发现可能表明，与健康对照相比，偏头痛患者即使在发作间期也存在脑内炎症和结构过程的变化。然而，未来需要结合细胞水平受体及影响受体结合的因素进行综合评估，并对这些参数开展进一步研究，以更全面地阐明其在偏头痛中的临床意义和病理生理作用。
