《Stroke》：Immune Checkpoint B7-H3 Inhibition Reprograms Acute Neuroinflammation and Protects the Brain After Acute Ischemic Stroke
编辑推荐：
背景：尽管免疫检查点与炎症性衰老（inflammaging）和卒中后感染具有临床意义，但免疫检查点B7-H3在急性缺血性卒中预后和卒中后免疫抑制中的作用尚未被研究。在本研究中，研究人员探讨了急性缺血性卒中后调节脑内B7-H3诱导的效果，并评估了其对脑损伤、神经
背景：尽管免疫检查点与炎症性衰老（inflammaging）和卒中后感染具有临床意义，但免疫检查点B7-H3在急性缺血性卒中预后和卒中后免疫抑制中的作用尚未被研究。在本研究中，研究人员探讨了急性缺血性卒中后调节脑内B7-H3诱导的效果，并评估了其对脑损伤、神经炎症、血管完整性、宿主防御基因调控和功能结局的纵向影响。
方法：对C57BL/6小鼠进行短暂大脑中动脉闭塞（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO），在再灌注后5分钟经静脉注射B7-H3小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）或阴性（非靶向）小干扰RNA。在卒中后第1、3和7天，使用9.4-T扫描仪对小鼠脑进行磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI），以评估脑损伤（T2、表观扩散系数和峰度）和血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）完整性（T1增强）。采用实时定量PCR（real-time qPCR）和NanoString nCounter神经炎症检测板确定B7-H3介导的总体神经炎症功能的急性变化。在再灌注第1至7天之间评估运动功能。
结果：卒中后早期抑制B7-H3显著减少了血脑屏障破坏和脑损伤，并促进了功能结局。B7-H3抑制后，卒中后神经炎症被重新编程，以平衡神经保护性抗炎机制，同时不损害对预防卒中后感染至关重要的免疫应答。
结论：对血脑屏障、梗死和促炎细胞因子的纵向评估表明，卒中后急性期B7-H3的诱导介导了卒中后神经炎症和继发性脑损伤。
急性缺血性卒中（acute ischemic stroke，AIS）是全球致死致残的主要疾病之一，卒中后免疫抑制（poststroke immunosuppression）使患者易发肺炎和泌尿系感染，显著增加死亡风险。免疫检查点在衰老大脑和脑血管疾病中表达失调，其中B7-H3（CD276）作为一种双向免疫检查点，可调节T细胞活性、胶质神经炎症、神经血管完整性，并在中枢神经系统疾病中介导损伤与修复机制。已有研究表明，B7-H3上调可加剧血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）破坏、细胞因子风暴和神经损伤；B7-H3敲除小鼠在实验性自身免疫性脑脊髓炎中表现出显著减轻的神经炎症和神经保护。然而，在急性缺血性卒中后，B7-H3的病理生理作用及其干预价值尚不明确。鉴于B7-H3在实验性卒中中的表达时间谱与早期神经炎症波一致，研究人员推测其可能参与急性期神经炎症和继发性脑损伤的调控，因此开展了本研究，以填补这一空白。该研究发表于《Stroke》杂志。
研究人员采用成年C57BL/6小鼠，建立短暂大脑中动脉闭塞（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO）模型，在再灌注后5分钟经静脉注射B7-H3小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）或阴性对照siRNA，以实现B7-H3的早期抑制。在卒中后第1、3、7天，使用9.4-T磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）评估脑损伤（T2、表观扩散系数和峰度）和BBB完整性（T1增强）；通过实时定量PCR和NanoString nCounter神经炎症检测板分析神经炎症相关基因表达；采用转棒试验和平衡木试验评估运动功能恢复。主要关键技术方法包括：tMCAO模型诱导局灶性脑缺血、siRNA介导的B7-H3基因沉默、多参数MRI纵向监测、基因表达谱分析及行为学测试。样本均来自C57BL/6小鼠，各实验组样本量根据检测指标不同为3至13只不等。
结果部分包含三个主要发现。第一，B7-H3抑制减少急性缺血性卒中后BBB破坏、脑损伤并促进功能结局。通过T2、T1增强MRI以及表观扩散系数和扩散峰度图谱，研究人员发现，与阴性siRNA组相比，B7-H3 siRNA处理组在再灌注第1、3、7天的梗死体积显著减小，BBB破坏程度明显减轻。扩散加权MRI对组织微结构变化敏感，缺血区域表观扩散系数降低而扩散峰度增加；B7-H3 siRNA组的这些变化得到改善，表明细胞毒性水肿和梗死进展受到抑制。行为学测试中，B7-H3 siRNA组在再灌注第1至7天的转棒和平衡木表现显著优于对照组，表明早期B7-H3抑制具有神经保护作用并促进功能恢复。
第二，卒中后B7-H3具有促炎作用并影响BBB完整性。在卒中后24小时，实时定量PCR检测显示，B7-H3敲低显著降低了TLR-4（toll-like receptor 4，Toll样受体4）、IL-1β（interleukin-1β，白细胞介素-1β）、MMP9（matrix metalloproteinase-9，基质金属蛋白酶-9）和VEGF（vascular endothelial growth factor，血管内皮生长因子）的mRNA表达，但CCL3（CC-chemokine ligand 3，CC趋化因子配体3）和TNF-α（tumor necrosis factor-α，肿瘤坏死因子-α）的表达保持不变。同时，B7-H
