《Autoimmunity》：Androgen-associated remodeling of pulmonary NK cells and sex-biased susceptibility in lupus-associated diffuse alveolar hemorrhage
编辑推荐：
弥漫性肺泡出血（DAH）是系统性红斑狼疮（SLE）一种致死性、女性偏倚的并发症。尽管适应性免疫已知为驱动因素，但固有淋巴样细胞（ILCs）在DAH中的作用以及性激素对此过程的贡献仍不清楚。为表征DAH期间肺ILC重塑并评估雄激素信号是否调节自然杀伤（NK）细胞
弥漫性肺泡出血（DAH）是系统性红斑狼疮（SLE）一种致死性、女性偏倚的并发症。尽管适应性免疫已知为驱动因素，但固有淋巴样细胞（ILCs）在DAH中的作用以及性激素对此过程的贡献仍不清楚。为表征DAH期间肺ILC重塑并评估雄激素信号是否调节自然杀伤（NK）细胞稳态与疾病严重程度，研究人员在C57BL/6J与Rag2?/?小鼠中建立pristane诱导的DAH模型，通过单细胞转录组学与流式细胞术分析肺ILCs，比较健康人类与小鼠基线性别差异，并行男性去势、雌性丙酸睾酮（TP）给药及抗体介导NK细胞耗竭等体内干预。DAH伴随C57BL/6J与Rag2?/?小鼠肺NK细胞频率显著下降，表明此为不依赖适应性淋巴细胞的固有特征。DAH相关NK细胞呈活化但受限状态，效应基因Prf1与Ifng上调，同时抑制受体基因Lag3表达增加。基线时健康人类女性与雌鼠NK细胞频率低于雄性。雄性去势未显著改变DAH严重程度，而雌性TP处理恢复肺NK细胞优势并显著减轻疾病严重度。激发前耗竭NK细胞致出血加重趋势（p=0.084）。肺NK细胞在狼疮相关DAH模型中减少且可能参与疾病发生；雄激素处理恢复肺NK细胞优势并减轻DAH严重度，支持进一步探索恢复或维持肺NK细胞稳态与功能作为DAH潜在治疗策略。
研究背景：系统性红斑狼疮（SLE）是一种异质性自身免疫病，弥漫性肺泡出血（DAH）是其急性致死性肺部表现，临床呈女性偏倚。传统认为免疫复合物沉积与中性粒细胞介导的血管损伤为主因，肺微环境中髓样细胞病理被广泛研究，但固有淋巴样细胞（ILCs，组织驻留的黏膜屏障免疫哨兵）的作用不清；同时性激素调控ILC生物学，但雄激素是否经NK细胞影响DAH性别易感性未知。为此，研究人员整合单细胞转录组与体内功能实验，在pristane诱导的小鼠DAH模型中解析肺ILC/NK重塑及雄激素干预效应。该研究发表于《Autoimmunity》，揭示NK细胞在DAH中的保护倾向及雄激素—NK轴与性别偏倚的关联，为DAH治疗提供新方向。
主要关键技术方法：研究人员使用pristane腹腔注射诱导C57BL/6J及Rag2?/?（缺乏成熟T/B细胞）小鼠DAH模型；采集健康人外周血（93名志愿者，男43/女50）与小鼠肺、肝、肾组织；通过流式细胞术分选CD45+Lin?细胞并行10× Genomics单细胞RNA测序（scRNA-seq）；采用去势/卵巢切除、丙酸睾酮（TP）肌注、抗NK1.1抗体体内耗竭等干预；以流式与组织学评分评估DAH严重度，Seurat分析scRNA-seq数据。
研究结果：
3.1 pristane诱导DAH模型优化：标准0.5 mL致约40%小鼠发病，1.25 mL致70%–90%稳定DAH，用于后续机制研究。
3.2 单细胞图谱揭示DAH中ILC/NK组成改变：scRNA-seq显示DAH肺中NK细胞比例下降、ILC3上升；NK细胞上调Prf1、Ifng、Lag3，代谢转向碳代谢/柠檬酸循环与自噬。
3.3 ILC与NK亚群通路富集与拟时序：ILC1呈未折叠蛋白应激与谷胱甘肽代谢富集、Gzmb/Lag3上调而Ifng降低；ILC2现修复与应激并存表型；ILC3向氧化磷酸化偏移、Rorc下调Il17a上调；拟时序见ILCP向ILC1及ILC2/3分支。
3.4 WT与Rag2?/?小鼠流式验证：两品系DAH均见NK减少、ILC1增多，证明不依赖适应性淋巴细胞；但Rag2?/?中ILC2/3下降，提示辅助ILC反应品系差异。
3.5 基线NK与ILC组成的性别差异：健康女性人外周血与雌鼠多组织NK频率低于雄性；雌鼠肺ILC1高于雄鼠，但NK普遍偏低。
3.6 雄激素调节DAH易感与严重度：卵巢切除不变严重度；雄性去势无显著影响；雌性TP处理在0.5 mL与1.25 mL挑战下均显著减轻DAH。
3.7 NK细胞促成雄激素相关保护：抗NK1.1耗竭使出血严重度分布加重趋势（p=0.084）；TP在雌性肺内恢复Group 1 ILC中NK优势，肝/肾NK占CD45+比升。
讨论总结：研究人员指出，既往pristane-DAH研究聚焦髓样细胞（单核细胞、M1巨噬细胞来源exosomal miR-132-3p破坏肺泡屏障），本研究补充了ILC/NK视角——DAH中NK频数减少且呈“活化受限”态（Prf1/Ifng/Lag3共表达），与SLE患者NK减少/功能受损一致；雄激素经可能IL-15依赖途径维持NK稳态，TP恢复肺NK优势并减毒，耗竭NK则倾向重症，构成雄激素—NK轴解释女性偏倚。ILC1/2/3虽扩增但伴应激重编程，Rag2?/?中ILC2/3不升仍发DAH，提示非主要驱动。局限为未用人DAH肺验证、雄激素直接/间接作用未完全分离。
结论翻译：综上，本研究揭示DAH中肺固有淋巴样群体重塑，特征为ILC1、ILC2、ILC3扩增同时NK细胞减少；并确定先天淋巴区室中存在性别相关差异，女性基线NK表征更低。这些结果共同表明雄激素状态与肺NK细胞稳态及DAH严重度相关。上述发现支持进一步探究雄激素相关NK细胞轴作为狼疮相关DAH的潜在治疗方向。
