《International Journal of Molecular Sciences》：METTL14-Mediated lncRNA MSTRG.292666.16 m6A Modification Promotes the Progression of Non-Small-Cell Lung Cancer Through the MAPK Pathway
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Yes关联蛋白（YAP）和含PDZ结合基序的转录共激活因子（TAZ）是肝星状细胞（HSC）活化与肝纤维化的重要调控因子。尽管经典的YAP/TAZ-TEAD轴已被充分表征，但在HSCs中协调纤维化程序的非经典相互作用伙伴及下游长链非编码RNA（lncRNA）仍不
Yes关联蛋白（YAP）和含PDZ结合基序的转录共激活因子（TAZ）是肝星状细胞（HSC）活化与肝纤维化的重要调控因子。尽管经典的YAP/TAZ-TEAD轴已被充分表征，但在HSCs中协调纤维化程序的非经典相互作用伙伴及下游长链非编码RNA（lncRNA）仍不明确。研究人员在LX-2细胞中采用BioID与下一代测序（NGS）鉴定YAP/TAZ互作组及YAP/TAZ调控的lncRNA。BioID结果与邻近连接实验（PLA）确定转录因子Kaiso为TAZ相互作用伙伴。功能上，Kaiso敲低抑制LX-2细胞中HSC活化的关键表型。研究人员进一步将LX-2细胞中YAP/TAZ敲低获得的NGS结果与公开Kaiso ChIP-seq数据整合，鉴定出HIF1A-AS3为共同下游lncRNA。ChIP-qPCR证实Kaiso直接结合HIF1A-AS3启动子。此外，HIF1A-AS3沉默可再现Kaiso敲低的功能效应。对TAZ、Kaiso或HIF1A-AS3敲低后的全局蛋白质组学分析揭示了一组共同调控蛋白，富集于HSC活化核心通路。综上，研究人员确立Kaiso为新型TAZ相互作用伙伴，并鉴定HIF1A-AS3为TAZ与Kaiso共享的下游靶标，提示其构成促进HSC活化的促纤维化调控网络，可能成为肝纤维化的治疗靶点。
研究背景与立项依据
肝纤维化源于慢性肝病持续炎症与创伤愈合反应，核心事件为肝星状细胞（HSC）转分化为肌成纤维细胞并过度沉积细胞外基质（ECM）。Hippo通路效应因子YAP/TAZ在肝损伤时入核，驱动HSC活化与促纤维化基因（如α-SMA）表达。YAP/TAZ无固有DNA结合能力，依赖TEAD等经典伙伴及非经典伙伴调控转录。长链非编码RNA（lncRNA）在HSC活化中作用日益明确，但YAP/TAZ及其非经典互作伙伴如何调控lncRNA以促进纤维化尚不清楚。该研究即在此空白上，利用LX-2人HSC模型系统绘制YAP/TAZ互作组与下游lncRNA谱，挖掘新型非经典轴。
主要技术方法概览
研究人员以LX-2细胞（来自商业化永生化人HSC系）为唯一模型，依次采用：①稳定表达BirA-Flag-YAP/TAZ的BioID近端标记联合LC–MS/MS绘制互作组；②邻近连接实验（PLA）验证内源TAZ-Kaiso空间互作；③siRNA敲低YAP/TAZ、Kaiso、HIF1A-AS3并结合RNA-seq（NGS）筛选差异lncRNA；④公开Kaiso ChIP-seq（GSE169918）与本室ChIP-qPCR验证启动子占用；⑤全蛋白质组学（LC–MS/MS）比较三者敲低的差异表达蛋白（DEP）并做GO/PPI分析；⑥功能端证包括BrdU、克隆形成、Transwell迁移、Western blot、免疫荧光。无原代HSC或动物验证。
研究结果
2.1 BioID鉴定YAP与TAZ在HSCs中的共有及独有互作伙伴
LC–MS/MS显示YAP互作蛋白263个、TAZ 412个，共有224个。已知伙伴（TEAD、AMOTL1/2、LATS1）重现，证实体系可靠；TAZ独有互作者数量约为YAP独有者近五倍，提示TAZ在HSC中互作谱更广。
2.2 富集分析揭示YAP/TAZ互作组关联HSC关键进程
共有互作组富集Hippo信号、RNA命运与蛋白合成；YAP独有者偏细胞骨架组织；TAZ独有者富集增殖、迁移、Wnt信号与细胞骨架，表明YAP/TAZ虽为旁系同源但分工不同。
2.3 转录因子Kaiso是TAZ互作伙伴
从TAZ独有互作者中经AnimalTFDB筛转录因子，锁定Kaiso。PLA显示内源TAZ与Kaiso近距离信号；单细胞HSC图谱（小鼠n=57233，人n=774）推断Kaiso活性在肌成纤维细胞中更高，支持其促活化潜质。
2.4 Kaiso调控HSC纤维化活化
siKaiso显著降低Kaiso mRNA/蛋白，随之α-SMA蛋白与免疫荧光强度下降，BrdU增殖、克隆形成与Transwell迁移均受抑，以迁移抑制最显著。
2.5 鉴定HIF1A-AS3为YAP/TAZ与Kaiso共调lncRNA
YAP/TAZ双敲RNA-seq得145差异lncRNA，按注释可靠、肝表达、下调≥25%、无肝纤维化先例缩至14个；叠加重叠Kaiso ChIP-seq启动子峰得8个，选HIF1A-AS3（YAP/TAZ敲低后下调最强）。qRT-PCR证TAZ或Kaiso敲低均降其表达；ChIP-qPCR证Kaiso直接占其启动子。
2.6 HIF1A-AS3调控HSC纤维化活化
siHIF1A-AS3降α-SMA mRNA/蛋白/荧光、抑BrdU增殖、克隆形成与迁移，表型与siKaiso高度相似。
2.7 TAZ、Kaiso与HIF1A-AS3调控重叠蛋白质组网络
三者敲低各得425、397、406个DEP，117个交集；Spearman相关0.81–0.86。GO富集单原子阴离子转运与细胞迁移；PPI枢纽含EFTUD2、NCBP1（mRNA加工）、GPI（糖酵解）、RRAGC/D（mTOR）。结论：三者收敛于迁移相关蛋白网络，并联通转录后调控与代谢重编程。
讨论与结论翻译
讨论指出，BioID揭示YAP/TAZ非经典互作广度，HSC中TAZ互作不对称广于YAP（不同于肝细胞）。Kaiso首在HSC中被证为TAZ伙伴，且首报Kaiso直接转录激活HIF1A-AS3（既往仅知HIF1A诱导）。TAZ/Kaiso/HIF1A-AS3轴类比TAZ/TEAD模式，三者敲低蛋白质组高度相关支持功能汇聚。功能上Kaiso与HIF1A-AS3促HSC活化，尤推迁移，与DEP富集一致。局限为仅LX-2单细胞系，缺原代HSC与体内印证。
结论译文：本研究探究HSCs中YAP/TAZ驱动纤维化活性的介质，聚焦新型互作伙伴与下游lncRNA。研究人员鉴定Kaiso为具促纤维化活性的TAZ互作者，并显示lncRNA HIF1A-AS3受TAZ与Kaiso共同调控、参与HSC活化；TAZ、Kaiso与HIF1A-AS3共享高度相关蛋白质组特征。综上，这些发现描述了一种潜在的TAZ/Kaiso/HIF1A-AS3轴，可能协调HSCs中纤维化程序，并值得作为肝纤维化治疗靶点进一步研究。论文发表于《International Journal of Molecular Sciences》。
