摘要
成年后持续的精子发生是由一种称为精原干细胞（SSCs）的稀有而独特的细胞群保障的，这些细胞能够自我更新和/或分化为精子细胞。精原干细胞也是保护动物生物多样性的重要遗传资源。然而，在体外分离和培养精原干细胞仍然是一个巨大的挑战，在兔子中这方面的研究尤为不足。本研究的主要目的是从兔子睾丸中分离、培养并深入研究精原干细胞。具体而言，通过机械和酶处理方法分离出兔子睾丸组织，然后将获得的体细胞和生殖细胞在补充了维持精原干细胞自我更新和增殖所需特定分子因子（如GDNF、GFRα-1、FGF2等）的培养基中短期培养。使用免疫荧光和PCR技术对培养的精原干细胞进行分子谱分析，而透射电子显微镜（TEM）则揭示了它们的超微结构。几周后，出现了圆形或葡萄状的精原干细胞克隆，它们在饲养层细胞上生长。研究发现，这些细胞对DBA、GFRA1、PLZF、RET、PGP9.5、DAZL和DDX4等标记物呈阳性反应。通过Real-Time Quantitative PCR（RT-qPCR）和ddPCR技术进一步观察到这些细胞中多个标记物的表达增加（RET、PLZF、PGP9.5、DAZL、DDX4、CDH1、CD9、CD14、CD90、c-kit、ALDH、SSEA-4、SALL4、OCT4和SOX2）。透射电子显微镜观察还显示其具有原始未分化细胞的典型超微结构。总之，我们成功建立了一种用于分离、培养和表型分析兔子精原干细胞的方法，这可能有助于进一步进行冷冻保存。然而，培养精原干细胞的自我更新、增殖和分化能力还需通过体内移植实验来验证。
