《Acta Histochemica》：Reduced number of epithelial tuft cells and density of LGR5 expression in the myenteric plexus of the ageing human colon
编辑推荐：
研究人员发现，在老年成人升结肠和降结肠黏膜隐窝中，环氧化酶-1(COX-1)阳性的簇细胞(tuft cells)数量减少。LGR5表达定位于人升结肠和降结肠肌间神经丛(myenteric plexus)。在老年成人中，升结肠肌间神经节内LGR5免疫反应性降低，
研究人员发现，在老年成人升结肠和降结肠黏膜隐窝中，环氧化酶-1(COX-1)阳性的簇细胞(tuft cells)数量减少。LGR5表达定位于人升结肠和降结肠肌间神经丛(myenteric plexus)。在老年成人中，升结肠肌间神经节内LGR5免疫反应性降低，而降结肠中未呈现明确下降。推进性衰老可能与化学感受功能减弱及肌间神经丛内稳态机制改变相关。
研究背景与立项依据
近年来，学界日益关注成人结肠在衰老进程中的结构与功能改变。已有最大规模研究显示，近端结肠肌间胆碱能功能随龄下降，传入神经支配功能在升结肠与降结肠/乙状结肠中丧失，但黏膜层功能研究未见年龄相关变化。结构学研究则提示，衰老伴随杯状细胞丢失、缝隙连接蛋白减少及黏膜肌层弹性纤维增加等改变，可能削弱黏膜屏障。簇细胞是表达富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(LGR5)的肠上皮后有丝分裂细胞，是人类结肠上皮中唯一选择性表达环氧化酶-1(COX-1)的细胞类型，承担腔面化学感受、免疫协调与屏障维护功能。LGR5传统上被视为上皮干细胞标记，但其在中枢神经元及Wnt信号中的角色提示它可能在神经组织亦有作用。然而，人类结肠肌间神经丛(ENS亚群)中LGR5的空间分布未知，衰老是否影响簇细胞丰度亦未明。为此，研究人员以COX-1为簇细胞标记、以LGR5为探测分子，比较年轻与老年成人升结肠(AC)与降结肠(DC)的上皮与肌间神经丛改变。
主要技术方法与样本队列
研究采用既往描述的存档全层结肠标本，来源为因非梗阻性肠癌行手术切除、距瘤缘5–10 cm的“大体正常”组织；年轻组升结肠n=6(30–52岁)、降结肠n=10(42–60岁)，老年组升结肠n=12(70–89岁)、降结肠n=5(67–82岁)，排除放化疗、活动性炎性肠病及功能性肠病。技术主线为甲醛固定石蜡包埋、苏木精-伊红(H&E)形态学核验、热诱导表位修复后免疫荧光(抗COX-1与抗LGR5)，ImageJ定量：簇细胞按每隐窝及每mm2黏膜计数，肌间神经节LGR5以阳性像素占神经节总面积的面积分数(area fraction)表示，统计用独立样本t检验与单因素ANOVA。
研究结果
3.1 结肠组织完整性组织学评估
H&E显示各年龄组AC与DC黏膜、黏膜下层及肌间神经节结构完整，无炎症、溃疡或肿瘤性异常，证实样本适用于免疫荧光分析。
3.2 簇细胞分布
COX-1免疫荧光确认簇细胞位于隐窝基底部至中段，呈瓶状、顶膜红荧光。老年组AC每隐窝6.6±0.4降至2.3±0.1，DC 6.3±0.5降至3.6±0.2；标准化至黏膜面积后，AC减少约59%，DC减少约43%，均具统计学意义。
3.3 肌间神经丛LGR5免疫反应性表达
年轻组两区域肌间神经节均见LGR5-IR。老年组AC面积分数由0.63±0.07×10?3降至0.26±0.03×10?3(p=0.023)；DC由年轻至老年呈下降趋势但未达显著(p=0.079)。
讨论浓缩
研究人员指出，簇细胞减少可能反映衰老致上皮更新、干细胞功能或分化通路受损，而非疾病性扩增；其与IL-25-固有淋巴样细胞轴减弱可能损害化学感受、屏障修复与微生物互作。LGR5于肌间神经节的检出延伸了Wnt/R-spondin敏感程序在肠神经回路中的证据，但其细胞身份(神经元/胶质/祖细胞)待定。AC更显著的改变与既往“近端结肠更易受龄”一致。局限包括样本量小、单标记识别簇细胞、未校核上皮细胞核密度及肿瘤微环境远位效应。
结论翻译
成人衰老伴随升结肠与降结肠COX-1阳性上皮簇细胞减少，以及升结肠肌间神经节LGR5-IR选择性衰减。这些改变提示腔面化学感受减弱及ENS中Wnt相关或祖细胞样程序改变。连同老年结肠已观察到的其他退行性改变，上述变化可能降低功能储备，增加结肠对致慢性便秘与失禁等症状的年龄相关改变的易感性。需进一步研究机制以开发靶向干预。
（载于《Acta Histochemica》）
