《Antimicrobial Agents and Chemotherapy》：XAB06, a glyco-humanized broad-spectrum anti-Pseudomonas aeruginosa polyclonal antibody, protects mice in a lethal sepsis model
编辑推荐：
抗生素耐药铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）的全球上升 necessitates 新型治疗策略的开发。多克隆抗体（polyclonal antibodies，pAbs）构成一种有前景的方法，因其靶向多个细菌表位与功能，且近期以其
抗生素耐药铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）的全球上升 necessitates 新型治疗策略的开发。多克隆抗体（polyclonal antibodies，pAbs）构成一种有前景的方法，因其靶向多个细菌表位与功能，且近期以其人源化形式展现出重新焕发的临床适用性。研究人员通过用临床常见五种PA血清型免疫猪，开发了一种靶向PA的糖基人源化多克隆抗体（glyco-humanized pAb，GH-pAb）。该五价GH-pAb命名为XAB06，对用于免疫的五种血清型及无关PA血清型均表现结合活性；对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌或鲍曼不动杆菌无结合活性，证实XAB06对PA的特异性。此外，XAB06与人血细胞无反应性。功能实验显示XAB06显著抑制群集运动（swarming motility）、生物被膜形成及绿脓菌素（pyocyanin）产生，表明其干扰PA关键毒力决定簇。值得注意的是，XAB06在采用参考株PAO1、PA103及ST235高危克隆的小鼠脓毒症模型中赋予保护。综上，这些发现证明XAB06的广泛PA覆盖与保护活性，支持其作为抗PA新治疗策略的潜力。
研究背景与立项依据
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）为革兰阴性条件致病杆菌，属ESKAPE耐药病原组，2024年被世界卫生组织列为高优先级病原。其在医院获得性感染中占10%–15%，ICU及血流感染患者多重耐药（multidrug resistant，MDR）分离株流行率约20%，病死率30%–60%。PA具LPS（脂多糖）、鞭毛蛋白（flagellin）、Ⅴ型菌毛、绿脓菌素、蛋白酶、胞外多糖等丰富毒力因子，并由三套群体感应（quorum sensing，QS）网络调控。现有抗生素管线不足，单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）受单靶点免疫逃逸、成本与工艺制约；多克隆抗体（pAb）可广谱中和但受异种糖基（Neu5Gc、α-Gal）免疫原性限制。糖基人源化（glyco-humanized，GH）pAb剔除异种糖基，已在COVID-19及实体器官移植中显现安全曲线。临床PA血清型分布不均，O1/O2/O4/O6/O11合计>60%侵袭性感染，故研究人员以五价全菌灭活免疫双敲除（CMAH?/?与GGTA1?/?）猪制备GH-pAb XAB06，系统评估其体外识别、功能抑制与体内保护，论文发表于《Antimicrobial Agents and Chemotherapy》。
主要关键技术方法
研究人员采用双敲除CMAH与GGTA1猪，以热灭活O1/O2/O4/O6/O11五价全菌悬液经四次免疫，第四轮采血经Protein A层析纯化IgG得XAB06；以法国巴斯德所保藏CIP系列O1–O11、PAO1（CIP104116）、PA103（CIP102967）及Smaltis提供ST235克隆H27244为抗原与攻毒株，大肠埃希菌ATCC25922等作特异性对照；体外以全菌ELISA、免疫荧光、C1q招募实验测结合与补体活化，以半固体琼脂测群集运动、结晶紫测生物被膜、氯仿萃取测绿脓菌素；人PBMC（法国血液中心来源）测结合/补体裂解/IL-6、TNFα分泌；体内采用8–12周RjOrl:SWISS雌鼠，5%猪胃黏液裹载LD100菌量腹腔攻毒，攻毒前3 h腹腔予12.5/25/50 mg/kg XAB06或非免疫IgG或1 mg/kg Gremubamab（MEDI3902），观察10 d临床评分与生存。
研究结果
免疫双敲除猪制备单价与五价血清：单价O6免疫血清对O6强结合但对O1/O2/O4/O11交叉弱（<20% O6信号）；五价免疫血清对混合抗原及多数单独血清型结合较单价提升1.5–5倍，证实多价拓宽覆盖且无免疫干扰。纯化所得XAB06对O1–O11及PAO1、PA103、H27244均结合，对E. coli、K. pneumoniae、E. cloacae、A. baumannii几乎无信号；XAB06结合后 recruits 人C1q于各血清型，opsonophagocytic killing 仅约30%提示非主要杀菌机制；XAB06不与hPBMC结合、不引补体裂解、不诱IL-6/TNFα，显低免疫原性。
XAB06与Gremubamab比较：Gremubamab对重组PcrV结合远强于XAB06，但全菌ELISA中XAB06对9种血清型信号更高，提示XAB06表位不限于PcrV而涉表面多糖、外膜蛋白等多结构。
XAB06降低PA运动、生物被膜与绿脓菌素：对PAO1群集面积显著缩减，对O6株（ATCC33354）中等抑制；生物被膜在500 μg/mL下PAO1降72%、O6降42%；绿脓菌素PAO1在125/250/500 μg/mL分别降55%/76%/82%（O6不产），IC50 biofilm 61.6 μg/mL、pyocyanin 94.7 μg/mL，提示干扰QS连通网络。
五价IgG在小鼠脓毒症模型抗菌活性：PAO1攻毒下XAB06 12.5/25/50 mg/kg剂量依赖改善临床评分（12 h P<0.01，18 h P<0.005）并提升生存（P<0.0001），50 mg/kg等效人4 mg/kg（BSA标度）；Gremubamab 1 mg/kg保护有限；同剂量XAB06对PA103与ST235克隆H27244亦显著保护。
讨论与结论翻译
讨论指出，GH-pAb兼具多表位识别与已证临床安全，是抗MDR-PA创新路径。热灭活全菌留可溶性因子，五价选型依临床频率与MDR关联（O4/O11）而定，XAB06未失O6效价且覆盖未免疫O5（PAO1）与O12-MDR，无免疫干扰。相较Gremubamab，XAB06全菌结合更强且特异于PA，不扰肠道菌群。其功能抑运动（疑碍鼠李糖脂）、抑生物被膜与绿脓菌素，多点扰QS，比单靶mAb/抗生素更难耐药。小鼠血药推算156–625 μg/mL落于体外活性窗；模型为预防型腹腔脓毒症，限在治后给药与肺炎/UTI等组织特异场景待扩。结论：XAB06代表抗PA新选项，同步靶多表位与毒力通路，集广谱识别、强生物活性与高特异性于一身，结合GH-pAb已证人用安全耐受，系未来抗PA感染治疗开发之有望候选。
