《Current Issues in Molecular Biology》：Dynamic Changes in PD-L1, VEGF, and TILs Following Neoadjuvant Therapy in Residual Invasive Breast Cancer
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背景/目的：新辅助治疗（NAT）可能重塑乳腺癌微环境。研究人员评估了新辅助治疗前后程序性死亡配体1（PD-L1）、血管内皮生长因子（VEGF）和肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的配对变化，及其与残存肿瘤负荷（RCB）和生存期的关联。方法：这项回顾性研究纳入102例
背景/目的：新辅助治疗（NAT）可能重塑乳腺癌微环境。研究人员评估了新辅助治疗前后程序性死亡配体1（PD-L1）、血管内皮生长因子（VEGF）和肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的配对变化，及其与残存肿瘤负荷（RCB）和生存期的关联。方法：这项回顾性研究纳入102例新辅助治疗后存在残存浸润性乳腺癌的患者：34例Luminal B样/HER2阴性、34例Luminal B样/HER2阳性和34例三阴性乳腺癌（TNBC）。PD-L1采用22C3联合阳性评分评估，VEGF通过细胞质染色强度评估，基质TILs依据国际推荐标准评估。结果：肿瘤大小中位数从2.5 cm降至1.7 cm（p < 0.001），PD-L1 CPS（联合阳性评分）从6降至5（p = 0.039），TILs从15%降至10%（p < 0.001），而VEGF则向更强染色方向转变（p = 0.03）。在TNBC中，PD-L1 CPS从10降至5（p = 0.003），TILs从20%降至8%（p < 0.001）。在整体队列中，生物标志物与RCB无关联。初始肿瘤大小可预测RCB II/III（OR：2.60，p = 0.038）。总生存期因亚型而异（p < 0.001）。结论：NAT诱导了亚型依赖性的免疫和血管生成变化，支持在残存病灶中进行生物标志物再评估。
乳腺癌是一种异质性疾病，其内在肿瘤生物学特性、宿主免疫状态以及基质和血管因素共同决定治疗敏感性和预后。新辅助治疗最初主要用于局部晚期肿瘤的降期，目前已成为生物学侵袭性乳腺癌亚型治疗的重要组成部分。除提高保乳手术可行性外，新辅助治疗还提供了体内治疗反应检测的窗口，并形成了独特的配对样本环境，可将治疗前核心穿刺活检组织与手术时残存病灶进行比较。病理学反应具有临床信息价值，病理学完全缓解与患者层面长期预后改善相关，尤其在TNBC和HER2阳性疾病中。在残存浸润性病变患者中，残存肿瘤负荷指数提供了可重复的连续性和分类性测量指标，纳入了残存乳腺肿瘤的尺寸、细胞密度以及淋巴结受累情况。然而，单纯的解剖学反应指标无法充分描述治疗压力下发生的生物学选择和适应过程。
PD-L1是关键的免疫检查点蛋白，其与活化淋巴细胞上的程序性细胞死亡蛋白1相互作用可减弱抗肿瘤免疫。PD-L1评估在乳腺癌中具有临床相关性，但结果取决于肿瘤背景、抗体克隆、染色平台、细胞群体和评分算法。22C3联合阳性评分整合了PD-L1阳性肿瘤细胞、淋巴细胞和巨噬细胞相对于存活肿瘤细胞数量的比例。由于PD-L1具有空间异质性和生物学动态性，治疗前结果可能无法完全代表新辅助治疗后的残存肿瘤微环境。基质TILs提供了抗肿瘤免疫参与度的形态学测量指标。配对研究显示PD-L1和TILs可能在全身治疗后发生变化，但变化方向和幅度在不同队列间存在差异，这可能反映亚型、治疗方案、样本类型、残存病灶选择以及PD-L1评估方法学的差异。VEGF是血管生成、血管通透性和肿瘤缺氧适应的主要介质，可抑制树突状细胞成熟、损害T细胞运输和功能、促进免疫调节细胞群体并增加免疫检查点表达。然而，同时检查新辅助治疗前后PD-L1、VEGF和TILs的临床配对样本数据仍然有限。
研究人员因此开展了一项配对研究，比较诊断性核心活检和新辅助治疗后残存乳腺肿瘤之间PD-L1 CPS、VEGF染色强度和基质TILs的变化。预设目标包括比较Luminal B样/HER2阴性、Luminal B样/HER2阳性和三阴性肿瘤的基线生物标志物谱；量化整体及各亚型中治疗相关生物标志物变化；检查与RCB分级和残存肿瘤细胞密度的关系；以及按替代亚型探索总生存期。研究假设为NAT将诱导免疫和血管生成特征的亚型特异性重塑，且治疗前生物标志物表达与残存疾病程度相关。
该研究经奥西耶克大学医院中心伦理委员会批准，采用回顾性设计，共纳入102例残存浸润性乳腺癌患者，三个亚型各34例。研究排除了病理学完全缓解病例，因其无残存肿瘤组织可供分析。PD-L1免疫组织化学在Dako Omnis平台上使用22C3克隆抗体进行检测，以CPS评分评估表达。VEGF使用C-1克隆抗体在Ventana BenchMark Ultra平台上检测，以细胞质染色强度半定量评估（0-3级）。基质TILs根据国际TILs工作组推荐标准在H&E染色切片上评估。RCB采用MD Anderson方法计算并分类为RCB I、II或III。生存分析从初次诊断日期计算至任何原因导致的死亡，采用Kaplan-Meier分析和log-rank检验。统计检验包括Wilcoxon符号秩检验、McNemar-Bowker检验、Spearman相关分析和单变量逻辑回归分析，使用MedCalc?统计软件版本23.4.8执行。
患者与治疗前肿瘤特征方面，102例患者中100例为女性，2例为男性。TNBC具有较高比例的III级肿瘤和最高的Ki-67中位数（70%）。治疗前PD-L1 CPS在亚型间差异显著，TNBC中位数10，Luminal B样/HER2阴性为1.5，Luminal B样/HER2阳性为0。基线基质TILs水平无显著差异。VEGF强度在亚型间有差异，TNBC中47%显示强染色，高于Luminal B样/HER2阴性的24%和Luminal B样/HER2阳性的18%。
配对变化方面，整体队列中肿瘤大小中位数从2.5 cm降至1.7 cm，PD-L1 CPS从6降至5，基质TILs从15%降至10%，VEGF染色分布向更强强度转变。免疫变化呈亚型依赖性：TNBC中PD-L1 CPS从10降至5，TILs从20%降至8%；而两种Luminal亚型中PD-L1统计学上保持稳定。TNBC中，14例从CPS ≥ 10转为< 10，无一例从< 10转为≥ 10。ΔTIL与ΔVEGF呈负相关，而ΔPD-L1与ΔVEGF无显著相关性。
残存疾病与RCB方面，RCB I见于11例，RCB II 67例，RCB III 24例，亚型间分布无显著差异。整体队列中，治疗前肿瘤大小和临床T分期与残存肿瘤细胞密度正相关。在TNBC中，治疗前肿瘤大小与RCB分级和残存细胞密度正相关。PD-L1 CPS、基质TILs或VEGF强度与RCB分级无显著相关性。
与较大残存肿瘤负荷相关的因素方面，单变量逻辑回归显示初始肿瘤大小是唯一与RCB II/III显著相关的变量（每增加1 cm OR 2.62，95% CI 1.05-6.54）。ROC分析显示治疗前肿瘤大小具有中等判别能力，>2.6 cm阈值获得45%敏感性和100%特异性。
总生存期方面，100例患者中记录29例死亡，TNBC中15例，Luminal B样/HER2阴性10例，Luminal B样/HER2阳性4例。Kaplan-Meier曲线显示亚型间显著差异，TNBC中位OS为31个月，两种Luminal亚组均未达到中位OS。
讨论部分指出，该研究证实NAT伴随残存乳腺癌中免疫和血管生成特征的可测量亚型依赖性重塑。TNBC中PD-L1 CPS和TILs的显著下降表明治疗减少了抗原性肿瘤质量并耗竭或重新分布了免疫细胞群体。VEGF强染色的增加提示残存病灶可能富集血管生成或缺氧适应表型。基线生物标志物与RCB无显著关联可能归因于队列仅包含残存疾病患者、缺少RCB 0病例以及RCB I组样本量有限。初始肿瘤大小与较大残存负荷的关联提示基线解剖学负荷的重要性。临床意义方面，PD-L1具有生物学动态性，但其临床效用取决于具体情境；残存疾病可能变得更具血管生成性且免疫浸润减少，支持联合血管正常化和免疫导向策略的转化研究。研究局限性包括回顾性单中心设计、样本量有限、排除pCR病例导致的选样偏倚、治疗方案异质性以及PD-L1评估限于22C3 CPS方法。
研究结论为：NAT与乳腺癌微环境的亚型特异性变化相关。在残存TNBC中，PD-L1 CPS和基质TILs显著降低，而Luminal B样/HER2阴性和Luminal B样/HER2阳性肿瘤中PD-L1统计学上保持稳定。整体队列中VEGF表达在治疗后向更强强度转变。治疗前PD-L1、TILs和VEGF与RCB分级无关联，而较大初始肿瘤大小与残存浸润性疾病患者中更大的残存肿瘤负荷相关。这些发现支持将配对生物标志物评估作为表征治疗诱导的生物学变化的手段，而非治疗特异性预测效用的证据。在动态PD-L1或VEGF测量可指导临床决策之前，需要纳入包括pCR在内的完整反应谱的前瞻性、治疗分层研究。
