18β-甘草次酸通过抑制PARP1/NF-κB p65核转位减轻多杀性巴氏杆菌诱导的血管损伤

《Animals》：18β-Glycyrrhetinic Acid Attenuates Pasteurella multocida-Induced Vascular Injury via Inhibition of PARP1/NF-κB p65 Nuclear Translocation

　　

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida, Pm）是一种人畜共患病原体，可引起猪严重出血性肺炎，其特征为血管损伤和全身性炎症反应。研究人员先前的研究表明，源自甘草的生物活性三萜类化合物18β-甘草次酸（18β-glycyrrhetinic acid, GA）通过抑制聚（ADP-核糖）聚合酶1（poly(ADP-ribose) polymerase 1, PARP1）介导的核因子kappa B（nuclear factor-kappa B, NF-κB）和高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1, HMGB1）信号通路，保护机体免受Pm诱导的血管炎症损伤。然而，GA是否调控PARP1介导的NF-κB p65核转位（NF-κB活化的关键步骤）仍不清楚。本研究利用Pm感染小鼠模型和猪髂动脉内皮细胞免疫荧光染色，评估了GA的保护作用及其潜在机制。结果表明，GA处理可减轻Pm感染小鼠的体重下降，改善血液学和生化参数，并减少血管结构损伤。在机制上，Pm感染诱导PARP1上调，伴随磷酸化p65（phospho-p65, p-p65）核转位，而这些均被GA抑制。PARP1过表达驱动p-p65核积聚，该效应可被GA逆转，而PARP1敲低则抑制Pm诱导的p-p65核转位。上述发现表明，GA通过抑制PARP1介导的NF-κB p65核转位来保护机体免受Pm诱导的血管损伤，支持其作为Pm相关血管损伤候选治疗药物的潜力。

本研究旨在探讨18β-甘草次酸（GA）对多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida, Pm）诱导的血管损伤的保护作用及机制。Pm是一种人畜共患病原体，在猪中主要引起出血性肺炎，以血管损伤和全身性炎症反应为特征。血管内皮作为动态屏障，其完整性对维持器官稳态至关重要，而内皮功能障碍会加剧感染期间的炎症级联反应。目前抗生素和疫苗是控制Pm感染的主要手段，但抗生素无法解决已发生的血管内皮炎症损伤，且过度使用加剧了耐药性；糖皮质激素和非甾体抗炎药虽能抑制炎症，但存在胃溃疡和免疫抑制等副作用。因此，亟需开发安全有效的替代药物。GA是从甘草根中提取的五环三萜类化合物，具有抗炎、抗氧化、心血管保护等活性。研究人员前期发现GA可抑制PARP1介导的NF-κB和HMGB1信号，减轻Pm诱导的猪髂动脉内皮细胞（PIECs）炎症损伤，但未明确其是否影响NF-κB p65核转位这一关键步骤。鉴于PARP1可通过PARylation p65阻断其核输出，或作为转录共激活因子增强NF-κB活性，本研究在Pm感染小鼠模型和PIECs中评估了GA的保护效应，并重点解析PARP1介导的p65核转位机制。该研究发表于《Animals》。

研究人员采用SPF雌性BALB/c小鼠（每组10只，购自湖北省实验动物中心），通过腹腔注射80 CFU Pm HB03（由华中农业大学Bin Wu教授惠赠）建立感染模型，并设对照组、Pm感染组及7.5、15、30 mg/kg GA治疗组。细胞实验使用猪髂动脉内皮细胞（PIECs，来源于中国科学院国家认证细胞培养库），采用免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜检测PARP1和p-p65的亚细胞定位，并通过PARP1过表达及siRNA敲低进行功能验证。主要统计方法为方差分析和t检验。

3.1 GA对Pm感染小鼠体重的影响：通过测定肺和血管组织细菌载量，确认Pm感染模型建立成功，感染组细菌载量约为10⁶ CFU/g。Pm感染小鼠出现体重显著下降（p<0.01），而15和30 mg/kg GA处理显著减缓体重下降（p<0.01），表明GA可缓解Pm感染引起的临床症状。

3.2 GA对Pm诱导的血液学和生化参数的影响：血液学分析显示，Pm感染显著升高白细胞、中性粒细胞和单核细胞计数，GA处理（尤其15和30 mg/kg）显著降低这些炎症相关指标。生化分析显示，Pm感染导致肝肾功能指标（AST、ALT、CREA、UREA等）显著升高，GA处理显著改善上述异常，表明GA可减轻Pm引起的全身炎症和多器官损伤。

3.3 GA对Pm诱导的血管组织病理学的影响：H&E染色显示，Pm感染组出现弹力纤维断裂、血管内膜局灶性破坏和炎症细胞浸润，而15和30 mg/kg GA处理组基本恢复正常的血管结构，提示GA保护血管结构完整性。

3.4 GA抑制Pm诱导的PARP1/NF-κB p65核转位：免疫荧光结果显示，Pm感染增加PARP1和p-p65的核平均荧光强度（MFI）及p-p65的核浆（N/C）比，GA预处理显著抑制这些变化。PAR