共轭亚油酸通过重塑脂质代谢和抑制MAPK/NF-κB介导的炎症级联反应缓解雌二醇诱导的FLHS公鸡肝脏脂肪变性及肝损伤

《Animals》：Conjugated Linoleic Acid Alleviates Hepatic Steatosis and Liver Damage in Estradiol-Induced FLHS Roosters by Reshaping Lipid Metabolism and Inhibiting the MAPK/NF-κB-Mediated Inflammation Cascade

　　

脂肪肝出血综合征（FLHS）是蛋鸡中一种常见的代谢性疾病，造成严重的经济损失。先前的研究表明，共轭亚油酸（CLA）可缓解鸡只雌激素诱导的FLHS，但其机制尚不清楚。在本研究中，研究人员发现CLA改善了FLHS鸡的血清脂质稳态，减少了肝脏脂质积累，并增强了抗氧化活性。转录组分析鉴定出差异表达基因富集于炎症反应、脂质稳态、碳水化合物代谢以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）/胰岛素信号通路。代谢组分析检测到差异丰度代谢物富集于胆汁分泌、甲状腺激素合成、胰岛素信号通路和甘油磷脂代谢。综合分析显示，CLA通过上调保护性代谢物（如泛醇）和下调促炎/促脂质生成代谢物（如15-氢过氧二十碳-8Z,11Z,13E-三烯酸），与关键基因调控（脂肪酸合酶、jun原癌基因和脂肪酸脱饱和酶2）及核心通路活性（MAPK/核因子κB抑制、PPARα激活）协同作用，重塑了肝脏代谢谱。这项使用雌二醇诱导的公鸡FLHS模型的多组学研究阐明了CLA抵抗肝脏脂肪变性和肝损伤的分子调控网络，并为开发CLA功能性添加剂以预防和治疗商业蛋鸡FLHS提供了初步机制线索。

脂肪肝出血综合征（fatty liver hemorrhagic syndrome, FLHS）是蛋鸡生产中一种常见的代谢性疾病，以肝脏和腹腔过度脂质沉积、肝脏脂肪变性、肝破裂甚至出血为特征，可导致产蛋率和蛋品质显著下降，造成严重经济损失。流行病学调查显示，FLHS在商品笼养蛋鸡中占死亡原因的40%~70%。FLHS的病因涉及营养、遗传、环境和激素等因素，但现有研究多集中于营养失衡诱导的模型，激素稳态紊乱在其发生发展中的作用尚不清楚。为了规避卵巢周期性激素波动、产蛋周期及卵黄前体代谢的混杂影响，研究人员选用雄性Hy-line白来航鸡建立雌二醇苯甲酸酯诱导的FLHS模型，以特异性研究雌激素激活的肝脏脂质合成、炎症和氧化应激信号通路。共轭亚油酸（conjugated linoleic acid, CLA）是一类含有共轭双键的亚油酸衍生物，在多种动物模型中表现出调节能量代谢、炎症状态和氧化还原稳态的活性。前期研究发现CLA可缓解雌二醇诱导的鸡FLHS，但其分子机制尚未阐明。基于此，本研究结合肝脏转录组学和代谢组学，系统探讨CLA对FLHS公鸡的肝保护机制，挖掘核心基因、关键代谢物及信号通路串扰，为开发防治家禽FLHS的CLA功能性饲料添加剂提供理论依据。该研究发表在《Animals》。

在技术方法方面，研究人员将120只120日龄雄性Hy-line白来航鸡随机分为非注射对照组和FLHS模型组，其中FLHS组通过肌注雌二醇苯甲酸酯（2 mg/kg体重，隔日一次，共7次）构建模型。随后从FLHS组中随机选取30只，饲喂添加0.5% CLA的日粮8周（CLA组）。通过血清生化分析检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）；肝脏组织检测脂质含量、丙二醛（MDA）及抗氧化酶（CAT、SOD、GSH-Px）活性；苏木精-伊红（H&E）和油红O染色评估组织病理学变化。采用RNA-seq进行肝脏转录组测序，采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行广泛靶向代谢组学分析，并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot验证关键基因及蛋白表达。

研究结果如下：

3.1 CLA改善FLHS鸡的肝脏脂质代谢和氧化应激
结果显示，CLA处理显著降低FLHS鸡的肝脏器官指数和肝脏脂肪比例，改善血清脂质谱，表现为TG、TC、AST、ALT和LDL-C水平降低，HDL-C水平升高。肝脏大体观察显示，FLHS组肝脏体积增大、质地脆弱、颜色呈棕黄色，而CLA组肝脏恢复红褐色。组织学检查显示，CLA处理减少了肝细胞中脂滴数量，减轻脂肪病变、肝细胞空泡化和炎性细胞浸润。此外，CLA显著降低肝脏TG、TC和MDA含量，升高CAT、SOD和GSH-Px活性，表明CLA通过调节脂质代谢和增强抗氧化能力缓解肝脏损伤。

3.2 差异表达基因的鉴定与功能富集
转录组分析共鉴定出563个差异表达基因（DEGs），其中253个下调、310个上调。GO和KEGG富集分析显示，DEGs显著富集于炎症反应、胆固醇稳态、脂质稳态、碳水化合物代谢、MAPK信号通路、PPAR信号通路和脂肪酸代谢等。蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络及MCODE模块分析鉴定出两个核心基因：脂肪酸合酶（FASN）和JUN原癌基因（JUN），以及两个功能模块，分别涉及脂质代谢和炎症/胰岛素信号。qRT-PCR验证结果显示，CLA显著降低脂质合成相关基因（FABP4、FABP5、FASN、ME1、SCD、ADIPOQ）和促炎基因（IL1R1、IL6、IL8、TNFα、NF-κB、IL-1β）的mRNA表达，同时上调脂质分解基因（FADS2、HMGCS2）、抗炎基因（TGFB1）和抗氧化基因（SOD1、Nrf2、CAT）。Western blot结果显示，CLA提高p-ERK1/2/总ERK1/2比值，降低p-p38 MAPK/总p38 MAPK比值以及NF-κB和TNFα蛋白表达，表明CLA通过抑制MAPK/NF-κB炎症级联发挥保护作用。

3.3 差异丰度代谢物分析
代谢组学共注释到3077个代谢物，筛选出163个差异丰度代谢物（DAMs），其中133个上调、30个下调。HMDB分类显示，脂质和脂质样分子占比最大（39.6%）。KEGG富集显示DAMs主要富集于胆汁分泌、甲状腺激素合成、胰岛素信号通路和甘油磷脂代谢。相关分析显示，CLA上调的保护性代谢物如泛醇（QH₂）与抗氧化指标正相关，下调的促炎/促脂