4 种黄酮类化合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及机制

　　摘要： 本研究探讨木犀草素、槲皮素、桑色素和漆黄素4 种黄酮类化合物对黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）活性的抑制作用，旨在揭示结构差异对抑制活性的影响机制，为天然产物来源的XOD抑制剂研发提供科学支撑。研究采用酶动力学、圆二色性（circular dichroism，CD）光谱、荧光光谱及分子对接技术进行分析，探究木犀草素、槲皮素、桑色素和漆黄素4 种黄酮类化合物对XOD的抑制作用及机制。结果显示，4 种化合物均显著抑制XOD活性，其中木犀草素（半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50）＝1.68 μmol/L）和槲皮素（IC50＝1.77 μmol/L）抑制效果最优，显著高于阳性对照别嘌呤醇（IC50＝20.29 μmol/L）。抑制动力学结果表明，其抑制类型为混合型抑制，且在酶上均仅存在单一结合位点（n≈1），木犀草素结合亲和力最强（抑制常数为2.21 nmol/L）。CD光谱结果显示，黄酮类化合物破坏了XOD活性位点构象，使α-螺旋相对含量从24.8%增加到34.6%～45.4%。荧光光谱证实，黄酮类化合物通过静态猝灭方式猝灭XOD本征荧光，结合过程为自发放热反应过程（ΔH＜0，ΔG＜0），主要作用力为氢键和范德华力。分子对接模拟表明，B环二羟基是关键结合位点，与XOD活性口袋残基形成氢键网络；A环5,7-二羟基通过分子内氢键维持骨架平面性，增强结合稳定性，而羟基位置及空间排布差异会影响结合效果。