酷肾通关丸治疗良性前列腺增生的机制：TLR4/NF-κB通路与巨噬细胞M1极化的作用

《Journal of Molecular Histology》：Mechanism of Kushen Tongguan Pill on benign prostatic hyperplasia: roles of TLR4/NF-κB pathway and macrophage M1 polarization

　　

摘要

目的

研究苦参通癃胶囊 (KSTG) 对去势联合丙酸睾丸酮诱导的大鼠良性前列腺增生 (BPH) 的治疗作用，并探讨其与 Toll 样受体 4/核因子 κB (TLR4/NF-κB) 信号通路相关的潜在机制。

方法

通过去势联合皮下注射丙酸睾丸酮建立大鼠 BPH 模型。大鼠随机分为假手术组、BPH 组以及苦参通癃胶囊低、中、高剂量组 (2.52、5.04 和 10.08 g/kg)。干预 4 周后，称重前列腺湿重并计算前列腺指数；通过苏木素 - 伊红 (HE) 染色观察组织病理学变化；通过 Masson 三色染色评估胶原沉积和纤维化；通过免疫组织化学检测 α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA) 的表达；通过酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测量血清睾酮 (T)、雌二醇 (E2) 和双氢睾酮 (DHT) 水平；使用自动血细胞分析仪测量外周白细胞和中性粒细胞计数；进行甲苯胺蓝染色以观察前列腺组织中肥大细胞的浸润，评估局部慢性炎症。采用 RT-qPCR 检测前列腺组织中包括 TLR4、NF-κB p65、IKKα 和 IKKβ 在内的关键通路分子以及炎症标志物 TNF-α、IL-1β、MCP-1 和 iNOS 的 mRNA 表达。进行蛋白质印迹分析前列腺组织中包括 TLR4、MyD88、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65 和 p-NF-κB p65 在内的关键通路分子以及炎症标志物 iNOS 的蛋白表达。体外实验中，使用含苦参通癃胶囊血清处理 LPS/IFN-γ 诱导的 THP-1 来源的巨噬细胞。通过 RT-qPCR 测定巨噬细胞中 M1 极化标志物 (CD86、TNF-α、IL-6) 的 mRNA 表达。随后，收集各组巨噬细胞的条件培养基，并通过 CCK-8 检测评估其对 WPMY-1 细胞增殖的影响。

结果

与 BPH 组相比，苦参通癃胶囊呈剂量依赖性地降低前列腺体积、湿重和前列腺指数 (P < 0.05)，并改善了腺体增生和间质增厚的病理形态。苦参通癃胶囊呈剂量依赖性地降低血清 E2 水平和 E2/T 比值，并显著降低异常升高的血清 DHT 水平 (P < 0.05)。苦参通癃胶囊还降低了外周白细胞和中性粒细胞计数，下调了 TNF-α 和 IL-1β 的 mRNA 表达，并降低了前列腺组织中 iNOS 的蛋白表达 (P < 0.05)。甲苯胺蓝染色进一步显示，苦参通癃胶囊治疗减少了前列腺中肥大细胞的浸润，证实了局部炎症的缓解 (P < 0.05)。蛋白质印迹显示，苦参通癃胶囊显著抑制了前列腺组织中 TLR4 和 MyD88 的蛋白表达，并抑制了 IκBα 和 NF-κB p65 的磷酸化 (P < 0.05)。体外，含苦参通癃胶囊血清抑制了 THP-1 来源巨噬细胞中 M1 极化标志物 CD86、TNF-α 和 IL-6 的 mRNA 表达 (P< 0.05)。此外，经苦参通癃胶囊预处理巨噬细胞的条件培养基显著减弱了对 WPMY-1 细胞增殖的促增殖作用 (P < 0.05)。

结论

本研究证明苦参通癃胶囊可以显著调节 M1 巨噬细胞极化，从而缓解 BPH 大鼠的前列腺增生及相关激素水平。其治疗机制与抑制前列腺组织中 TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路的异常激活密切相关，从而减少巨噬细胞向 M1 表型的极化以及下游促炎因子的释放。这些发现为其临床应用提供了实验支持，并为开发针对免疫炎症微环境的新型 BPH 治疗策略提供了有价值的见解。