紫花苜蓿(Medicago sativa L.)主要作为优质牧草种植,其种子中含有超过30%的蛋白质,是一种前景广阔却尚未被充分利用的食品应用资源。本研究探讨了使用盐溶液(0-5% NaCl;S0-S5)和pH条件(2、10和12;分别为P2、P10、P12)的组合从紫花苜蓿种子中提取蛋白质的方法。基于得率和纯度,选择了pH 2(S0P2)、pH 10(S0P10)和pH 12(S0P12)的纯水提取条件。蛋白质纯度无显著差异(p > 0.05);然而,与S0P2和S0P12相比(p < 0.05),S0P10表现出更高的可溶性蛋白质含量(61.05%)、更低的表面疏水性(70.9 a.u.)和更高的总必需氨基酸含量(39.23 g/100 g)。S0P2在pH 2、7和9下的溶解度(40-70%)始终低于S0P10(86-90%)和S0P12(67-94%)(p < 0.05)。乳化活性指数范围为56-71 m2/g,其中S0P12最高(p < 0.05)。S0P10的乳液稳定性更高(17.5%)。起泡稳定性和起泡能力分别为95-97%和15-22%。S0P10在组中的所有可消化必需氨基酸评分(DIAAS)值更高(p < 0.05)(婴儿为0.78 ± 0.02,儿童为1.40 ± 0.04,成人为1.60 ± 0.05)。胰蛋白酶抑制剂活性和皂苷含量在S0P10中达到峰值(4.25 TUI/mg和13.5 mg/g),而植酸在S0P2中最高(1.68 g/100 g)(p < 0.05)。在pH 10条件下用水提取可实现更高得率,改善溶解性、氨基酸含量、功能性和DIAAS,确立了紫花苜蓿种子作为人类食品优质蛋白质来源的潜力。