摘要
柑橘根象鼻虫 Diaprepes abbreviatus 是柑橘和观赏作物的一种具有重要经济意义的害虫，其地下幼虫取食会损害根系，并使植株易受次生病原菌感染。开发高效的RNA干扰（RNAi）递送方法以针对早期幼虫阶段，对于功能基因组学研究以及基于RNAi的害虫管理策略评估至关重要。本研究开发了一种基于液滴的饲喂法，通过口腔途径将双链RNA（dsRNA）递送至 D. abbreviatus 初孵幼虫，并以几丁质合成酶2（DaCHS2）作为模型RNAi靶标来验证该方法的可行性。饲喂液中加入蔗糖和溴酚蓝染料，其中溴酚蓝用于目视确认摄入。在三个独立的生物学重复实验中，所有接触DaCHS2-dsRNA、GFP-dsRNA和水对照液滴的初孵幼虫均确认已摄食饲喂液（每处理组45/45只初孵幼虫；100%饲喂成功率）。口服递送靶向DaCHS2的dsRNA降低了转录本丰度，并与发育异常和死亡相关，包括蜕皮不完全、色素异常、表皮畸形、蛹化缺陷和成虫形态异常。回归分析表明dsRNA浓度与初孵幼虫死亡率和发育异常之间存在中等的显著相关性。RT-qPCR进一步证实口服dsRNA处理后DaCHS2转录本丰度降低。所开发的方法为向 D. abbreviatus 初孵幼虫口服递送dsRNA提供了一个简单、可重复且微创的概念验证平台。该方法仅需微量dsRNA，可提供摄入的目视确认，并可促进在 D. abbreviatus 及其他鞘翅目害虫中实验室筛选额外的RNAi靶基因。
亮点
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开发了一种基于液滴的饲喂法，用于通过口腔途径将dsRNA递送至D. abbreviatus 初孵幼虫。
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该方法可实现摄入的目视确认，并为D. abbreviatus 的RNAi筛选和功能基因组学研究提供了一种简单的实验室方法。
利益冲突
作者声明不存在利益冲突。
数据可用性声明
支持本研究结果的所有相关数据均呈现在本文的手稿图、视频和表格中，和/或可在 补充材料 中找到。
