基于分子对接、基因表达谱分析及氧化应激调节研究哈尔明碱对热带利什曼原虫的抗利什曼和免疫调节作用

《Scientific Reports》：Anti-leishmanial and immunomodulatory effects of harmaline against Leishmania tropica through molecular docking, gene expression profiling and oxidative stress modulation

　　皮肤利什曼病在许多流行区仍然构成重大的健康问题，这主要归因于现有疗法的多重局限，包括不良反应、药效降低以及耐药性寄生虫的不断涌现。本研究通过实验与计算相结合的方法，探讨了哈巴林（Harmaline, HAR）对热带利什曼原虫（Leishmania tropica）的抗利什曼虫潜力。研究分别采用基于MTT的活力评估方法和对吉姆萨染色感染巨噬细胞的显微镜计数方法，检测了前鞭毛体和细胞内无鞭毛体阶段的寄生虫敏感性。通过在THP-1来源的巨噬细胞中评估HAR的安全性，计算了IC50、CC50和选择性指数值。此外，采用实时PCR技术定量分析了凋亡相关标记物（Bax和Bcl-2）、与Th1/Th2免疫应答相关的细胞因子（IFN-γ、IL-12、TNF-α、IL-10和TGF-β）以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的转录变化。同时测定了活性氧（ROS）生成、一氧化氮（NO）释放及抗氧化酶活性，并利用磷脂酰丝氨酸V/碘化丙啶（Annexin V/PI）染色和流式细胞术分析确认了凋亡相关变化。通过计算机对接研究评估了HAR与iNOS及选择性凋亡调节蛋白的结合行为。哈巴林以浓度依赖的方式降低了两个发育阶段的寄生虫活力，并促进了凋亡反应，表现为Bax/Bcl-2比值升高和Annexin V阳性细胞群增加。HAR暴露进一步增强了ROS和NO的产生，同时降低了SOD和CAT活性，表明细胞环境向促氧化方向转变。此外，治疗还倾向于形成保护性免疫特征，表现为IFN-γ、IL-12和TNF-α表达增加，同时抑制IL-10和TGF-β。对接结果支持哈巴林与参与一氧化氮合成和凋亡调节的蛋白之间存在生物学相关相互作用的可能性。综上所述，这些发现表明哈巴林具有抗寄生虫和免疫调节双重作用，作为皮肤利什曼病管理辅助手段，有望成为进一步体内评估的候选药物。