地笋（Lycopus lucidus）生物活性组分抗牙龈卟啉单胞菌的抗氧化、抗菌及抗毒力活性

《Antioxidants》：Antioxidant, Antibacterial, and Antivirulence Activities of a Bioactive Fraction from Lycopus lucidus Against Porphyromonas gingivalis

　　

牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）是一种关键的牙周病原体，与生物膜形成和牙龈素（gingipain）介导的毒力相关。本研究评估了地笋（Lycopus lucidus）己烷提取物（LLH）及其8个色谱分离组分（H1–H8）的抗氧化、抗菌、抗生物膜和抗毒力活性。采用DPPH和ABTS自由基清除试验评估抗氧化活性，而抗菌活性、生物膜形成和毒力相关基因表达则通过相应的体外试验进行评价。LLH表现出抗氧化和抗菌活性，而H4在各组分中表现出最强的总体生物活性。LLH和H4的DPPH IC₅₀值分别为98.33 ± 2.05和60.67 ± 3.09 μg/mL，相应的ABTS IC₅₀值分别为89.24 ± 1.67和28.15 ± 1.21 μg/mL。H4还表现出比LLH更强的生物膜形成抑制能力，以及更显著地下调多个毒力相关基因。LC–MS/MS分析初步鉴定α-香附酮（α-cyperone）为H4的一种成分。总体而言，LLH的色谱分离产生了H4，其在多个检测终点（包括自由基清除、抗菌和抗生物膜效应）以及多个毒力相关基因的更强抑制方面均表现出增强的生物活性。然而，α-cyperone或其他单一成分对这些效应的贡献仍有待确定。

牙周炎是一种高发的慢性炎症性牙周支持组织疾病，由生态失调的菌斑生物膜驱动，可导致牙周组织进行性破坏和牙齿丧失。除微生物失调外，宿主-微生物互作中产生的过量活性氧（reactive oxygen species，ROS）可放大炎症反应并加速牙周组织损伤。牙龈卟啉单胞菌（Pg）作为关键病原体，通过表达脂多糖、菌毛和牙龈素（gingipain，包括精氨酸特异性RgpA和赖氨酸特异性Kgp）等毒力因子，破坏宿主免疫稳态，促进菌群失调和炎性骨吸收。现有治疗手段如机械清创和辅助抗菌治疗存在生物膜耐受、病原清除不彻底和复发等局限，因此需要兼顾抗氧化、抗菌和抗毒力作用的天然活性产物。地笋（Lycopus lucidus）是唇形科多年生草本植物，含有黄酮类、香豆素类、萜类、鞣质等活性成分，具有抗氧化、抗炎和抗菌等作用。在前期溶剂筛选中，地笋己烷提取物（hexane extract of Lycopus lucidus，LLH）对Pg表现出最强的抗菌活性，因此被选择进行进一步的色谱分离。然而，LLH各色谱组分对Pg的抗菌、抗生物膜和抗毒力作用尚未充分阐明。本研究旨在评估LLH及其色谱亚组分的抗氧化活性，并研究其对Pg生长、生物膜形成和毒力相关基因表达的影响，同时采用液相色谱-串联质谱法（LC–MS/MS）鉴定最活跃组分的化学成分。该研究发表于《Antioxidants》。

研究人员采用的关键技术方法包括：利用制备型高效液相色谱（preparative high-performance liquid chromatography，prep-HPLC）将LLH分离为8个组分（H1–H8）；采用DPPH和ABTS自由基清除试验评估抗氧化活性，用福林-酚法和二乙二醇比色法分别测定总酚（total phenolic content，TPC）和总黄酮