《Human Vaccines & Immunotherapeutics》：Nanoemulsion adjuvanted COBRA HA vaccine enhances protective antibody titers against H1N1 and H3N2 influenza viruses
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佐剂可增强肌内注射重组血凝素（hemagglutinin，HA）蛋白后诱发的免疫应答。本研究将计算优化广谱抗原（computationally optimized broadly reactive antigen，COBRA）设计的HA蛋白与W805EC油包水
佐剂可增强肌内注射重组血凝素（hemagglutinin，HA）蛋白后诱发的免疫应答。本研究将计算优化广谱抗原（computationally optimized broadly reactive antigen，COBRA）设计的HA蛋白与W805EC油包水纳米乳液（“NE01”）佐剂配伍，免疫小鼠并评估诱发的流感特异性体液与细胞免疫应答。接种佐剂化COBRA H1与H3 HA疫苗候选物的小鼠，其抗体滴度高于接种未佐剂化HA蛋白的小鼠。给予COBRA HA联合NE01的小鼠，针对一组H1N1与H3N2流感病毒具有更高血凝抑制（hemagglutination inhibition，HAI）特异性抗体滴度，以及更高水平的干扰素-γ（interferon-gamma，IFN-γ）分泌脾细胞。与接种未佐剂化疫苗的小鼠相比，接种佐剂化COBRA HA蛋白的小鼠在攻毒后体重下降显著更少，且肺内病毒滴度低至检测不到。
研究背景与立项依据
当前商业流感疫苗包括裂解灭活病毒、重组HA蛋白及减毒活病毒疫苗，因HA与神经氨酸酶（neuraminidase，NA）频繁发生抗原漂变，需每年重新配方，且疫苗株与流行株错配时保护效力仅10%–60%。为突破这一局限，研究人员此前开发了COBRA方法，通过对数千株人源临床分离株进行分层共识序列设计，捕获保守表位，使重组H1与H3 HA蛋白能识别多季节多毒株。然而重组蛋白疫苗单独使用常需高抗原剂量，佐剂可提升抗原摄取与呈递、改善免疫广度。NE01是一种平均粒径约460 nm的油包水纳米乳液，原用作鼻内季节性流感疫苗佐剂并具热稳定性，其在肌内注射途径下与COBRA HA配伍的价值尚未明确。该研究即在此基础上，探究NE01作为肌注佐剂能否增强COBRA HA对H1N1与H3N2的交叉保护与细胞免疫。论文发表于《Human Vaccines》。
主要关键技术方法
研究人员采用预免疫模拟自然免疫史：6–8周龄雌性DBA/2小鼠先经鼻感染历史株SG/86（H1N1）与PN/99（H3N2），静息后于第0与21天肌注双价COBRA rHA（Y2 H1 + NG5 H3），配伍或不配伍NE01（60%预制备液1:3稀释），设PBS+NE01模拟免疫对照；第42天经鼻攻毒BR/18（H1N1）。血清学评价包括ELISA测总IgG/IgG1/IgG2a、WHO方案HAI、MDCK-SIAT1细胞微量中和试验；细胞免疫用脾细胞抗HA抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）ELISpot及重叠肽池刺激IFN-γ ELISpot；保护性用攻毒后体重、临床评分与第3天肺匀浆空斑试验测病毒滴度；统计采用单因素/双因素ANOVA与Kruskal–Wallis检验。
研究结果
评估疫苗接种后血清学应答：二免后NE01组抗Y2与NG5总IgG及IgG1滴度显著高于未佐剂组（IgG2a亦升但IgG1为主，IgG1:IgG2a≈4:1），首免无检出。HAI显示NE01+COBRA Y2对2009–2022年6株H1N1均达血清保护界值（≥1:40）且近全群阳转，未佐剂组平均低4–8倍且约半数未阳转；NE01+NG5对2017–2023年6株H3N2中4株阳转，未佐剂组仅TS/20达界值。微量中和中NE01组抗BR/18与HK/19滴度比未佐剂组高2–4倍，TS/20两组相近。
佐剂化rHA疫苗较未佐剂化诱导更高频抗原特异性抗体分泌脾细胞：二免后第30天NE01组每百万脾细胞含Y2/BR/18/NG5/HK/19特异性ASC约40–60个，未佐剂组少2–3倍。
NE01佐剂HA COBRA疫苗较未佐剂诱导更高频IFN-γ分泌脾细胞：同时间点NE01组H1特异性IFN-γ斑点为未佐剂组16倍，H3为4倍。
流感病毒攻毒：BR/18攻毒后模拟组第3天降至原体重86%且肺病毒103–10? pfu/mL；所有NE01+COBRA组存活、体重降幅<5%、肺内病毒未检出；未佐剂COBRA组体重变化与佐剂组近似，但个别鼠肺内仍检出高滴度。
讨论与结论翻译
当前流感疫苗以HA为主靶标，已获批重组HA（如Flublok）虽剂量高仍常需佐剂辅助。COBRA通过多层共识序列整合近年循环株表位，唤醒异质记忆细胞群。本研究将COBRA H1/H3 rHA与NE01肌注小鼠，证实NE01促进抗原向淋巴组织转运、激活toll样受体（toll-like receptors，TLRs）与NLRP3炎症小体，诱发Th1/Th17偏向及黏膜-系统平衡应答；其提升HAI、中和滴度与IFN-γ? T细胞之效与MF59类佐剂Addavax相当，但未增加HA剂量。结论：将NE01纳米乳液加入下一代广谱COBRA HA蛋白，可作为肌注佐剂有效增强抗H1N1/H3N2保护性抗体与细胞免疫、降低抗原用量并保持单剂季免策略的可行性。
