《Environments》：Lichen Transplantation for Assessing Intra-Urban Environmental Stress: A Case Study in Jelgava, Latvia
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地衣移植可揭示城市环境中生物响应的空间变化，但可见活力无法识别特定污染物。研究人员将附生地衣Hypogymnia physodes从推测为低影响的森林区域移植到拉脱维亚叶尔加瓦的20个位点，并在243天内每月评估其可见状况。主要终点为首次观察到坏死；变色作为描
地衣移植可揭示城市环境中生物响应的空间变化，但可见活力无法识别特定污染物。研究人员将附生地衣Hypogymnia physodes从推测为低影响的森林区域移植到拉脱维亚叶尔加瓦的20个位点，并在243天内每月评估其可见状况。主要终点为首次观察到坏死；变色作为描述性次要状态保留。13个主要移植体出现坏死，首次检出时间在62至215天之间。1个移植体在修剪后第123天右删失，6个在第243天仍未观察到坏死。Kaplan–Meier分析得出首次观察到坏死的中位时间为184天（20个主要移植体；13个事件；7个删失）。一个描述性城市胁迫指数（Urban Stress Index, USI）总结了19个完整随访位点的事件发生时间。该指数与土地利用比例之间的相关性在统计学上不显著。与同地冬季积雪中Pb和Zn浓度的探索性相关性为负，与简单的金属毒性解释相反。观察到的坏死可能反映移植后环境条件改变而非金属积累；在缺乏同步空气和叶状体化学、微气候测量及位点重复的情况下，无法进行污染物来源归因。因此，该方法最适合用于探索性空间筛选和假设生成。
地衣移植作为一种低成本生物监测手段，常被用于评估城市环境对附生生物的影响，但其可见活力指标难以指向特定污染物。本研究针对拉脱维亚叶尔加瓦市开展了一项探索性实验，旨在回答城市内部不同位点间地衣可见坏死时间是否存在空间差异，以及该差异是否与土地利用类型或冬季积雪重金属浓度具有单调关联。研究人员从市区外一片假定低影响的森林采集附生地衣Hypogymnia physodes，保留其原始枝条，于2016年7月1日移植至叶尔加瓦20个监测位点，每月进行肉眼观察，持续243天。主要终点设为“首次观察到坏死”，变色仅作为描述性次要状态；因修剪导致的丢失记为右删失。研究最终有13个主要移植体发生坏死，首次检出时间范围在62至215天，7个观察被删失，Kaplan–Meier估计的中位首次坏死时间为184天，第243天未坏死概率为0.321。基于完整随访的19个位点，研究人员构建了描述性城市胁迫指数（Urban Stress Index, USI），该指数与各类土地利用比例的相关性均未达到统计学显著水平；与冬季积雪中Pb（ρ=-0.57，名义p=0.008）和Zn（ρ=-0.49，名义p=0.028）呈负相关，与简单金属毒性假设方向相反。论文强调，未同步测量微气候、空气和叶状体化学组成，且每个位点仅有一个主要移植体，因此无法将坏死归因于特定污染源；该方法更适合作为探索性空间筛选和假设生成工具。相关成果发表于《Environments》。
为开展研究，研究人员采用了以下关键技术方法：选取拉脱维亚叶尔加瓦市外森林区域作为地衣来源地，采集附生地衣Hypogymnia physodes，并保留其原生长枝条作为移植单元；在城市内20个位点进行移植，每月采用半定量肉眼评估记录可见状况，以首次观察到坏死作为时间-事件终点；采用Kaplan–Meier乘积限法估计无坏死生存概率并处理右删失数据；构建描述性城市胁迫指数（USI）用于位点排序；利用Spearman秩相关分析USI与土地利用百分比及同地冬季积雪金属浓度的关系。样本来源为Jelgava周边森林，具体位点信息及地衣照片已存入公共数据仓库。
### 3.1 Overall Vitality Outcomes
20个主要移植体中，13个在观察期内出现可见坏死，7个被右删失。其中5个在92天内出现坏死，5个在153至184天之间，3个在215天出现；另有4个位点仅变色无坏死，2个位点始终无可见损伤，1个因修剪在第123天删失。位点16和17的早期坏死促使研究人员放置了重复移植体，但这些重复仅作定性参考，未纳入统计分析。
### 3.2 Time-to-Event Survival Analysis
基于20个主要移植体、13个事件和7个删失数据的Kaplan–Meier分析显示，估计中位首次坏死时间为184天，第243天无坏死概率为0.321。由于样本量较小，置信区间较宽，数值应视为探索性描述。
### 3.3 Urban Stress Index
对19个有完整随访的位点，USI范围从0至0.745，均值为0.285，标准差为0.276，中位数为0.243。该指数仅概括坏死出现时间的相对早晚，并不代表污染物剂量或生理损伤的定量尺度。
### 3.4 Associations with Urban Structure
USI与各类土地利用比例的相关性均不显著：公共/商业用地（ρ=-0.26，p=0.265）、绿色/水体覆盖（ρ=-0.11，p=0.634）、低密度住宅（ρ=0.19，p=0.416）、混合住宅-商业（ρ=-0.03，p=0.891）和工业用地（ρ=0.02，p=0.925）。研究人员据此认为，在本样本中不存在USI与单一土地利用比例的单调关联，这些方向性结果不能解释为保护或损害效应。
### 3.5 Associations with Heavy Metals
与2017年2月积雪中Pb和Zn浓度的探索性相关为负：Pb（ρ=-0.57，名义p=0.008）、Zn（ρ=-0.49，名义p=0.028），Cr也为负（ρ=-0.44，p=0.051）但未达0.05阈值。这些结果与“金属沉积越多坏死越早”的简单假设相矛盾，可能反映时间错配、空间混杂、暴露几何或偶然性，不能证明金属具有保护作用，也未分析移植体叶状体的元素含量，因此无法评估实际摄取。
### 3.6 Attachment-Tree Sensitivity Check
接受树种类别分组样本量小且不均衡，由于地衣保留在原有枝条上，接受树仅作为局部位点微环境的代理。探索性Kruskal–Wallis检验未发现接受树组间存在显著差异（p>0.05），但这不能证明没有微环境影响，因为检验功效有限且无直接树木水平测量。
讨论部分指出，13/20的坏死率和中位184天的结果反映了移植结局的显著空间异质性，但不能量化为城市污染梯度。可能的影响因素包括大气污染物、湿润/干燥循环、湿度、太阳辐射、温度、风、枝条来源状况、接受树位置以及随机变异，这些因素均未测量，因此无法在本设计中分离。道路相邻位点的早期事件与文献中地衣对颗粒物和车辆污染物的响应模式相符，但本研究未测量车流量或PM，故只能使用“道路相邻”而非“高交通”来描述。积雪中Pb和Zn的负相关为反直觉发现，且因缺乏叶状体元素数据而无法支持金属毒性解释；鉴于欧洲苔藓监测显示1990-2010年Pb和Zn浓度下降，当前低沉降水平可能降低可见活力终点的区分度。绿色/水体覆盖与USI的关联很小且不显著，不能证明绿地缓冲作用。方法学贡献在于将时间-事件框架应用于视觉活力记录，Kaplan–Meier分析可适当处理删失数据，USI可作为描述性工具，但生存估计应作为主要结果。局限性包括无位点级重复、半定量视觉评分、每月观察的区间不确定性、缺乏微气候和化学测量等。最后，对结论部分的翻译如下：
对20个主要Hypogymnia physodes移植体的每月观察记录了其可见状况在城市内的显著空间变化。13个出现坏死，7个删失，Kaplan–Meier中位首次坏死时间为184天。由于未监测微气候和放置条件，观察到的坏死可能反映移植后环境条件改变导致的损伤或死亡，而非金属积累。土地利用相关性不显著，与冬季积雪Pb和Zn的负相关与简单金属毒性假设相悖。因此，结果未将交通、金属、工业或绿色基础设施确定为观察模式的成因。可见状况移植可支持低成本探索性空间筛选，但机理性解释需要位点级重复移植、标准化放置、客观活力评分、同步微气候和颗粒物测量以及叶状体配对化学分析。
