基于微流控的嵌合抗原受体T细胞快速制备技术提高了低感染复数下的转导效率，同时保持了功能活性

《Journal of Translational Medicine》：Microfluidic-based rapid generation of chimeric antigen receptor T cells improves low-multiplicity-of-infection transduction efficiency while preserving functional activity

　　摘要背景传统嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）制造需要较长时间的体外处理和大量的病毒输入。我们研究了短暂的T细胞激活结合闭环微流控循环是否能改善低感染复数（MOI）下的慢病毒转导效率，同时在24小时内生产出具有功能的CD19 CAR-T细胞。方法原代人T细胞使用CD3/CD28磁珠激活4小时，然后在MOI为0.5或1.0的条件下，用CD19 CAR/绿色荧光蛋白报告基因（CAR/GFP）慢病毒进行转导，并在供者匹配的微流控芯片与静态培养板之间进行比较。除另有说明外，微流控快速制造的CAR-T（MF-rmCAR-T）产品均在MOI 1.0条件下，通过20小时的闭环循环制备。传统制造的CAR-T（cmCAR-T）产品作为产品水平对照。评估第7天CAR/GFP阳性率、产品载体拷贝数（VCN）、细胞活力、扩增能力和表型，随后进行体外功能测试，并在全身Raji-Luc异种移植模型中进行探索性评价。供者匹配数据根据适用情况，使用配对t检验或双因素重复测量方差分析（带?ídák校正）进行分析。结果在MOI 0.5时，微流控处理显著提高了第7天CAR/GFP阳性率（14.6% ± 1.7% vs. 7.3% ± 1.2%；*p* < 0.001），在MOI 1.0时亦显著提高（22.1% ± 1.5% vs. 13.9% ± 1.7%；*p* < 0.001），且未降低细胞活力。MF-rmCAR-T与cmCAR-T产品在CAR/GFP阳性率、活力、活性细胞回收率和第7天扩增方面表现相当，但MF-rmCAR-T产品的载体拷贝数较低（1.2 ± 0.2 vs. 2.8 ± 0.4 拷贝/细胞；*p* < 0.01），中枢记忆性代表更高，且TIM-3和LAG-3表达更低。MF-rmCAR-T细胞在整体Raji-Luc杀伤能力方面数值更高，归一化至等效CAR/GFP阳性效应细胞数后裂解率也更高，同时IFN-γ释放量更高，共培养后PD-1表达更低。两种CAR-T产品均能降低肿瘤负荷并延长生存期，优于未转导的T细胞对照组，且CAR-T组间无显著差异。结论闭环微流控循环实现了24小时CD19 CAR-T制造流程，提高了低MOI转导效率，降低了产品载体拷贝数，同时保持了抗肿瘤活性。这些结果支持在更大规模的临床前研究和可扩展的封闭制造系统中进一步评估该工艺。